調(diào)經(jīng)活血湯對多囊卵巢大鼠排卵的影響.pdf

1、目的： 建立大鼠多囊卵巢綜合征病理模型，研究調(diào)經(jīng)活血湯對多囊卵巢(polycysticovarian，PCO)大鼠的血清激素水平、卵巢重量及形態(tài)、子宮內(nèi)膜病理學(xué)改變及卵巢顆粒細胞凋亡等的影響，從而探討調(diào)經(jīng)活血湯影響PCO大鼠排卵的機制，為多囊卵巢綜合征的藥物治療提供一種新選擇，為調(diào)經(jīng)活血湯的臨床使用提供實驗依據(jù)。 方法： 1)模型制作：6周齡清潔級SD雌性大鼠48只，隨機分成模型組(n=32)和正常組(n=16)

2、，模型組采用雄激素造模法，每天皮下注射脫氫表雄酮6mg/100g加0.2ml注射用油劑，連續(xù)20天，建立多囊卵巢大鼠模型。造模完成后模型組隨機抽取8只，通過血清激素水平和卵巢組織學(xué)多囊變來評價造模效果，造模成功率＞80％時，將模型組剩余大鼠隨機分成調(diào)經(jīng)活血湯治療組(中藥組)、來曲唑?qū)φ战M(對照組)和病理模型組各8只和最后剩余正常組大鼠8只。中藥組予調(diào)經(jīng)活血湯0.018ml/g/d的劑量于上午給予調(diào)經(jīng)活血湯灌胃，連用1周，對照組予來曲唑0

3、.00018mg/g/d的劑量于相同時間灌胃，連用5天，病理模型組及正常組大鼠每天給予普通食水喂養(yǎng)。 2)觀察指標： (1)用藥期間每天監(jiān)測動物體重變化； (2)干預(yù)完成后心臟采血放免法測血清激素水平(雄激素T、雌激素E2、孕激素P、黃體生成素LH、卵泡刺激素FSH)； (3)摘取各組大鼠雙側(cè)卵巢和子宮，肉眼觀察及HE染色觀察卵巢及子宮內(nèi)膜的病理形態(tài)改變。 (4)TUNEL法觀察各組卵巢顆粒細胞凋

4、亡情況； (5)免疫組化法觀察卵巢顆粒細胞Bcl-2和Bax蛋白表達水平。 結(jié)果： 1)動物模型成功的評價： ①陰道脫落細胞學(xué)檢查：陰道脫落細胞常規(guī)涂片顯微鏡檢查出現(xiàn)陰道上皮細胞持續(xù)角化者可考慮為造模成功； ②血清激素水平：模型組與正常組相比血清激素T、E2濃度增高；血清FSH↓；血清LH↑，血清激素P濃度降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，呈高T和LH激素改變狀態(tài)，提示造模成功； ③卵巢觀察：肉眼

5、觀察：模型組卵巢體積增大，可見雙側(cè)對稱性增大，亦可一側(cè)或單側(cè)略增大。色灰白或蒼白色，表面不光滑。切面質(zhì)韌，可有砂粒感。卵巢重量(濕重)及最大卵泡直徑與正常對照組有顯著性差異；HE染色：模型組卵巢出現(xiàn)大量小濾泡，包膜下含有很多閉鎖卵泡和處于不同發(fā)育階段的卵泡，但無成熟卵泡生成，更無排卵跡象，被膜肥厚，黃體數(shù)量少。顆粒細胞形態(tài)完整，顆粒細胞數(shù)量明顯減少。 2)藥物療效的評價： ①動物體重：中藥組體重(214.4±11.7g)

6、和對照組(225.5±14.3g)分別與病理模型組(245.8±15.7g)比較，動物體重增加幅度明顯降低，統(tǒng)計學(xué)有顯著性差異(P＜0.05)，中藥組和對照組比較的差異無統(tǒng)計學(xué)意義，(P＞0．05)； ②血清激素水平改變：血清T濃度中藥組(9.631±3.718ng/ml)和對照組(13.181±5.314ng/ml)分別與病理模型組(19.4±38.8ng/ml)比較顯著性降低(P＜0．05)，與正常組(7.569±4.333

7、ng/ml)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0．05)；血清E2濃度中藥組(11.685±6.158pg/ml)與對照組(16.551±6.932pg/ml)比較明顯降低(P＜0.05)；血清P濃度中藥組(40.463±9.668ng/ml)與對照組(31.125±8.257ng/ml)比較明顯升高(P＜0．05)，血清FSH濃度中藥組與對照組比較略升高，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；血清LH濃度中藥組與對照組比較略降低，差異無統(tǒng)計學(xué)意義

8、(P＞0.05)； ③組織學(xué)檢查：A．肉眼觀察：病理模型組卵巢體積增大，色蒼白，表面見多個明顯囊狀擴張。中藥組和對照組卵巢體積分別與病理模型組比較均減小，色紅潤，表面光滑未見明顯囊狀擴張；B．HE染色：病理模型組卵巢鏡下可見多個囊狀擴張的卵泡及閉鎖卵泡，體腔明顯增大，占據(jù)整個卵巢髓質(zhì)，顆粒細胞層明顯減少至1-2層，卵泡內(nèi)卵母細胞或放射冠消失，卵泡膜層增厚，未見黃體形成。中藥組和對照組卵巢鏡下可見多個囊狀擴張的卵泡，但體腔較對照組

9、明顯縮小，顆粒細胞層數(shù)增加分別至4-7層和3-5層，并可見少量黃體形成； ④TUNEL檢測顆粒細胞凋亡率：中藥組和對照組分別與病理模型組(43.351±2.523％)比較卵巢顆粒細胞凋亡率均呈顯著性降低(P＜0.01)，中藥組(30.156±2.094％)較對照組(40.225±9.89％)顯著性降低(P＜0.01)； ⑤免疫組化檢測Bcl-2與Bax表達水平的變化：中藥組和對照組分別與病理模型組比較，兩組均較病理模型組

10、卵巢顆粒細胞Bcl-2表達的OD值顯著性地增高(P＜0.05)，Bax表達的OD值顯著性地降低(P＜0.05)，中藥組卵巢顆粒細胞Bcl-2表達的OD值較對照組顯著性地增高(P＜0.05)，Bax表達的OD值較對照組顯著性地降低(P＜0．05)。 結(jié)論： ①成功制作PCO大鼠模型 ②調(diào)經(jīng)活血湯有改善多囊卵巢大鼠內(nèi)分泌狀況和降低體重增加幅度的作用，使多囊卵巢大鼠的卵巢顆粒細胞層數(shù)增加，黃體形成增加；使PCO大鼠的體