褪黑素對二甲基苯蒽誘導(dǎo)大鼠乳腺癌的影響.pdf

1、目的: 褪黑素主要由松果體分泌。其作為保健藥品風(fēng)靡歐美，F(xiàn)DA批準(zhǔn)使用，曾被譽(yù)為“90年代的神藥”。近年研究發(fā)現(xiàn)褪黑素對預(yù)防、治療腫瘤和延緩癌癥發(fā)展也有一定效果。褪黑素對體外培養(yǎng)的人乳腺癌MCF-7細(xì)胞具有抗增殖作用，目前認(rèn)為褪黑素的作用主要是通過雌激素通路，但在動物模型實(shí)驗(yàn)中褪黑素是否同樣發(fā)生抗腫瘤作用及其可能的機(jī)制目前國內(nèi)尚無相關(guān)研究及報(bào)道。在本實(shí)驗(yàn)中通過二甲基苯葸(DMBA)單次灌胃建立大鼠乳腺癌模型，不同時(shí)段加用褪黑素(

2、MT)進(jìn)行干預(yù)，觀察褪黑素對二甲基苯葸誘導(dǎo)大鼠乳腺癌的發(fā)生及生長的影響，并通過進(jìn)行免疫組化染色分析研究褪黑素對ER表達(dá)的影響，初步探討褪黑素對乳腺癌的抑制作用機(jī)制。 方法: 選擇6周齡健康雌性Wistar大鼠57只，體重范圍110-130g，由本校動物中心提供。置于室溫(21±2)℃，標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)。隨機(jī)分為3組，每組19只：A組(誘癌前應(yīng)用褪黑素)，B組(誘癌后應(yīng)用褪黑素)，C組(腫瘤對照組)。A組在灌胃給藥前2周開始每

3、日向飲用水中加褪黑素溶液飼養(yǎng)，B組、C組給無水乙醇溶媒對比，連續(xù)給藥14天；在鼠齡約8周時(shí)A組、B組、C組按每100g體重20mgDMBA單次性灌胃給藥； B組在灌胃給藥后每日向飲用水中加褪黑素溶液飼養(yǎng)，A組、C組給無水乙醇溶媒對比，連續(xù)給藥14天。二甲基苯蒽灌胃致癌后飼養(yǎng)24周，每周一、四觀察大鼠，記錄腫瘤發(fā)生部位、發(fā)生時(shí)間、腫瘤直徑，荷瘤數(shù)量，大鼠生長情況，第24周時(shí)處死大鼠，切取腫瘤組織記錄乳腺腫瘤發(fā)生的潛伏期、誘發(fā)率、腫瘤體積。

4、腫瘤組織做常規(guī)HE染色，利用光鏡進(jìn)行腫瘤細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)研究，免疫組化染色(SP法)分析ER表達(dá)情況。 結(jié)果: 1、腫瘤發(fā)生率： A組腫瘤發(fā)生率為44.4％，B組腫瘤發(fā)生率為50％， C組腫瘤發(fā)生率為82.35％，A組、B組的腫瘤發(fā)生率明顯低于C組。 2、腫瘤的平均潛伏期：各組動物的腫瘤平均潛伏期：A組為(139.6±18.6)天，B組為(131.4±22.8)天，C組為(115.2±23.6)天，A組、B組的潛伏

5、期明顯延長，C組與A組有顯著性差異。 3、平均腫瘤體積：腫瘤體積按公式(V=1/2ab2)計(jì)算，A組為(426.8±194.2)mm3，B組為(733.3±330.1)mm3，C組為(2127.1±877.8)/mm3，統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義。 4、光鏡觀察：A組8只大鼠12個(gè)乳腺腫瘤為乳腺癌，均為浸潤性導(dǎo)管癌； B組9只大鼠14個(gè)乳腺腫瘤中有13個(gè)為浸潤性導(dǎo)管癌，細(xì)胞分化較好，浸潤程度低于對照組，導(dǎo)管內(nèi)癌1個(gè)；C組14只大鼠22

6、個(gè)乳腺腫瘤均為乳腺癌，其中浸潤性導(dǎo)管癌20個(gè)，導(dǎo)管內(nèi)癌2個(gè)。光鏡結(jié)構(gòu)顯示C組惡性程度明顯。 5、免疫組化：在Ki67免疫組化染色中，A組陽性率為41.7％，B組陽性率為42.8％，C組陽性率為77.3％，C組與A組、B組有顯著性差異。ER染色顯示A組陽性率為25％，B組陽性率為28.6％，C組陽性率為63.6％，C組與A組、B組有顯著性差異。 結(jié)論: 通過DMBA灌胃可以獲得穩(wěn)定的大鼠乳腺癌模型。褪黑素對DMBA