溫度脅迫對(duì)小金蝠蛾幼蟲(chóng)抗氧化酶活性及Hsp70表達(dá)量的影響.pdf

1、小金蝠蛾Hepialus xiaojinensis Tu.是鱗翅目（Lepidoptera）、蝙蝠蛾科（Hepialidae）、蝠蛾屬（Hepialus）昆蟲(chóng)，是我國(guó)名貴中藥材冬蟲(chóng)夏草的寄主昆蟲(chóng)之一，所產(chǎn)冬蟲(chóng)夏草具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。為了改變冬蟲(chóng)夏草供不應(yīng)求的現(xiàn)狀，人工培植冬蟲(chóng)夏草寄主昆蟲(chóng)是解決資源匱乏的重要途徑。但是，從實(shí)際培養(yǎng)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，人工飼養(yǎng)的小金蝠蛾存活率極低，而前期研究表明溫度是影響其存活率的一個(gè)重要因子。當(dāng)環(huán)境溫度過(guò)高或者

2、過(guò)低時(shí)對(duì)于生物體來(lái)說(shuō)即是一種逆境，而生物對(duì)溫度脅迫適應(yīng)的機(jī)制研究目前主要集中在兩個(gè)方面：一是抗氧化保護(hù)酶，如超氧化物歧化酶（SOD）和過(guò)氧化氫酶（CAT）等；二是生物界普遍存在的熱激蛋白（Heat shock proteins,HSPs）。為了明確小金蝠蛾幼蟲(chóng)對(duì)溫度脅迫適應(yīng)性的機(jī)理，本文以小金蝠蛾的四齡幼蟲(chóng)為研究對(duì)象，主要對(duì)受到溫度脅迫后的幼蟲(chóng)體內(nèi)的抗氧化酶活性以及熱激蛋白Hsp70的表達(dá)量進(jìn)行了研究，旨在為提高人工飼養(yǎng)小金蝠蛾幼蟲(chóng)存活

3、率提供理論參考。主要研究?jī)?nèi)容如下：
　　1.溫度脅迫對(duì)小金蝠蛾幼蟲(chóng)抗氧化酶活性的影響
　　為了測(cè)定小金蝠蛾幼蟲(chóng)在受到溫度脅迫過(guò)后體內(nèi)的抗氧化酶活性變化，本實(shí)驗(yàn)在室內(nèi)設(shè)定了0℃、4℃、12℃、16℃、20℃、24℃、28℃7個(gè)溫度梯度，以8℃作為對(duì)照，設(shè)置4h和12h作為處理時(shí)間，將小金蝠蛾四齡幼蟲(chóng)置于各溫度時(shí)間條件下進(jìn)行脅迫處理。并測(cè)定不同溫度脅迫不同時(shí)間過(guò)后小金蝠蛾幼蟲(chóng)體內(nèi)幾種抗氧化酶的活性，以及脂質(zhì)過(guò)氧化水平。結(jié)果表明，

4、溫度脅迫能夠引起小金蝠蛾幼蟲(chóng)抗氧化酶活性的變化，其變化主要表現(xiàn)為：
　?。?）小金蝠蛾幼蟲(chóng)的SOD無(wú)論是否受到溫度脅迫都具有較高活性，SOD在清除活性氧（ROS）的過(guò)程中發(fā)揮著巨大的作用；
　　（2）對(duì)照組的CAT活性顯著性低于各溫度處理組，溫度脅迫誘導(dǎo)了小金蝠蛾幼蟲(chóng)的CAT發(fā)揮作用；
　?。?）不同溫度處理下小金蝠蛾P(guān)OD的活力呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，且在12h處理后CAT活力有所降低的時(shí)候，POD的活力會(huì)稍微上升，與CAT共

5、同作用控制H2O2的濃度；
　?。?）各溫度處理組的GSTs活性均低于對(duì)照組，經(jīng)過(guò)12h的脅迫過(guò)后，GSTs活性呈現(xiàn)降低趨勢(shì)；
　?。?）作為脂質(zhì)過(guò)氧化指標(biāo)的丙二醛MDA，在24℃脅迫過(guò)后，含量有升高的趨勢(shì)；
　?。?）從T-AOC的測(cè)定結(jié)果可以看出，小金蝠蛾在受到溫度脅迫后，體內(nèi)的總抗氧化能力顯著性升高，以維持幼蟲(chóng)體內(nèi)的氧化還原平衡狀態(tài)。
　　2.溫度脅迫對(duì)小金蝠蛾幼蟲(chóng)脂肪體Hsp70表達(dá)量的影響
　　測(cè)

6、定了高溫脅迫下小金蝠蛾幼蟲(chóng)脂肪體內(nèi)熱激蛋白Hsp70的表達(dá)量的變化。利用?-actin作為內(nèi)參基因，以含有Hsp70的cDNA為模板，結(jié)合實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)分別檢測(cè)了16℃、24℃、28℃和32℃脅迫4h和12h過(guò)后Hsp70基因的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果表明，在受到4h溫度脅迫后，小金蝠蛾幼蟲(chóng)脂肪體內(nèi)的Hsp70的表達(dá)量有比較顯著的變化（P<0.05），且均高于對(duì)照組的表達(dá)量。小金蝠蛾幼蟲(chóng)在受到16℃、24℃、28℃12h脅迫后，脂肪體內(nèi)

7、的Hsp70的表達(dá)量有顯著性的變化（P<0.05），與對(duì)照相比，均高于對(duì)照組的表達(dá)量。短時(shí)間（4h）脅迫后Hsp70的表達(dá)量均高于長(zhǎng)時(shí)間（12h）脅迫后的表達(dá)量。
　　3.基于小金蝠蛾幼蟲(chóng)蛋白質(zhì)組研究所鑒定到的熱激蛋白
　　熱激蛋白家族有分子伴侶的功能，分子伴侶是一類(lèi)特殊的蛋白質(zhì)分子，它與寡聚蛋白質(zhì)的組裝、新生肽鏈的折疊以及蛋白質(zhì)的跨膜運(yùn)輸都有關(guān)系。但是其本身又并不參與蛋白質(zhì)的組成。本實(shí)驗(yàn)在室內(nèi)設(shè)定了0℃、5℃、15℃、25