低氧對團頭魴細(xì)胞凋亡及抗氧化酶活性的影響.pdf

1、團頭魴（Megalobrama amblycephala）又稱武昌魚，是一種優(yōu)良的淡水經(jīng)濟魚類。近年來，隨著自然環(huán)境的不斷惡化以及人類活動的干預(yù)等使得其生存環(huán)境中時常出現(xiàn)低氧情形，制約了團頭魴養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。本研究以團頭魴為研究對象，觀察低氧處理后各個組織的結(jié)構(gòu)變化，分析低氧和復(fù)氧處理對肝臟中抗氧化酶活性的影響，通過TUNEL及熒光定量PCR檢測分析低氧對心肌細(xì)胞凋亡及抑凋亡基因bcl-2表達(dá)的影響。另外采用蔗糖梯度離心的方法提取心臟線粒

2、體，并分析線粒體中MDA含量及SOD活性的變化。主要研究結(jié)果如下:
　　1.低氧對團頭魴不同組織結(jié)構(gòu)的影響低氧（DO:0.5mg/L，嚴(yán)重低氧）處理團頭魴后取不同組織（心臟、肝臟、腎臟、肌肉、脾臟），通過組織切片染色觀察后發(fā)現(xiàn)低氧對團頭魴心臟和腎臟影響較大，心肌纖維腫脹，排列出現(xiàn)紊亂，而腎臟出現(xiàn)局部血管破裂的現(xiàn)象。低氧對肌肉、肝臟、脾臟結(jié)構(gòu)影響相對較小。
　　電鏡觀察顯示在中度低氧(DO:2.5±0.5mg/L處理2h，4h

3、)條件下，心臟線粒體的結(jié)構(gòu)遭到不同程度的破環(huán)，線粒體腫脹，結(jié)構(gòu)紊亂。嚴(yán)重低氧時，部分線粒體會發(fā)生破裂。
　　2.低氧引起心臟細(xì)胞凋亡為了進(jìn)一步研究低氧對心臟組織的影響，通過TUNEL(terminaldexynucleotidyl transferase TdT-mediated dUTP nick end labeling)及熒光定量PCR方法分析心臟組織的細(xì)胞凋亡、bcl-2的表達(dá)變化以衡量心肌細(xì)胞的凋亡情況。結(jié)果顯示低氧會引

4、起心臟細(xì)胞凋亡，并且隨溶氧濃度的降低及低氧處理時間的延長凋亡指數(shù)逐漸增加。在中度低氧組（DO:2.5±0.5mg/L）心臟中bcl-2的表達(dá)量也隨著低氧處理時間的延長逐漸降低，而嚴(yán)重低氧組(DO:0.5mg/L)中，其表達(dá)量顯著增加。
　　3.低氧對心臟線粒體SOD、MDA的影響基于蔗糖梯度離心法分離心臟線粒體，測定線粒體提取液蛋白濃度，然后檢測心臟線粒體中SOD和MDA活性。結(jié)果顯示在中度低氧處理組(DO:2.5mg/L±0.5