地奧司明(DOSM)對大鼠腎臟缺血再灌注損傷保護(hù)作用的實驗研究.pdf

1、缺血再灌注(Ischemia-Reperfusion,I/R)損傷具有種屬、器官的普遍性和廣泛性,涉及多組織、多器官的病理生理改變,臨床上常見于器官移植、術(shù),中血流阻斷、動脈阻塞性疾病治療過程中、休克等情況。腎I/R損傷是臨床上常見的病理生理過程,是引起急性腎功能衰竭的重要原因之一,常常難于避免,特別是在腎臟移植過程,I/R時腎組織細(xì)胞發(fā)生一系列功能、代謝和結(jié)構(gòu)的損傷,會導(dǎo)致移植腎功能延遲恢復(fù)、術(shù)后急慢性排斥反應(yīng)的發(fā)生率升高及原發(fā)移植腎

2、無功能,從而影響疾病的預(yù)后和手術(shù)的成敗,是導(dǎo)致再移植和影響病人存活的主要因素之一,有些學(xué)者甚至認(rèn)為I/R損傷對移植腎的影響要超過HLA配型不合。因此如何預(yù)防和減輕I/R過程中對腎臟造成的損傷,減少由此而致的急性腎衰、排斥反應(yīng)及移植腎功能損害仍然是我們面臨且急需解決的重要課題。
　　 腎I/R可引起一系列病理生理改變?nèi)缪軆?nèi)皮細(xì)胞腫脹和破壞,氧自由基的產(chǎn)生,微血管收縮,血小板及中性粒細(xì)胞粘附聚集,血流的降低,特別是氧自由基的改變,

3、可激活相關(guān)酶系統(tǒng)引起組織細(xì)胞發(fā)生一系列功能、代謝和結(jié)構(gòu)的損傷。
　　 地奧司明(DOSM)具有顯著的抗炎,抗氧化、改善微循環(huán)、抗血栓、調(diào)節(jié)免疫等作用逐漸為人們所認(rèn)識。有研究表明DOSM可減輕小腸I/R損傷及遠(yuǎn)隔臟器的次級損傷,可減輕骨骼肌和心臟I/R的損傷。理論上將DOSM的大部分重要生物效應(yīng)正好針對腎IRI的發(fā)生、發(fā)展中起關(guān)鍵作用的一些生物學(xué)機(jī)制,很可能對腎I/R損傷的重要發(fā)病環(huán)節(jié)起抑制作用。
　　 目的：本研究以阻斷

4、大鼠腎蒂血管的方式,造成大鼠實驗性缺血再灌注模型,觀察DOSM預(yù)處理對實驗性大鼠腎I/R損傷的保護(hù)作用,并探討其可能的保護(hù)作用機(jī)制,為臨床上移植器官缺血再灌注損傷及由此導(dǎo)致的急性腎功能衰竭等提供新的治療方法,為DOSM更廣闊的臨床新用途提供實驗依據(jù)和理論基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 1、實驗對象為健康雄性SD大鼠230只,體重200±20g,隨機(jī)分為3組:假手術(shù)組(Sham組)、缺血再灌注模型組(I/R組)、DOSM預(yù)處理

5、組(DOSM組)。DOSM處理組大鼠采用術(shù)前DOSM80mg/kg,每日灌胃兩次連續(xù)10天給藥,Sham組和I/R組大鼠均采用5％阿拉伯膠每日灌胃兩次,連續(xù)10天給藥。動物模型制作:戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后,無損傷微動脈夾夾閉左側(cè)腎蒂50分鐘后解除血管阻斷開放血流,觀察到腎臟在短時間內(nèi)由暗黑色逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)轷r紅色表示再灌注成功；開放前2min切除右側(cè)腎臟,建立大鼠急性腎缺血再灌注損傷動物模型。假手術(shù)組僅作麻醉、開腹,不夾閉左腎動脈,直接切除

6、一側(cè)腎臟,其他操作同模型組。DOSM預(yù)處理組操作與I/R模型組相同。術(shù)后12h、24h、48h和7d各時相點(diǎn)組繼續(xù)給予術(shù)前原用藥方案連續(xù)用藥處理,直至觀察終點(diǎn)。分別于腎臟恢復(fù)血流后1h、3h、6h、12h、24h、48h和7d留取血和腎組織標(biāo)本。
　　 2、采用全自動生化分析儀,分別測定3h、12h、24h、48h和7d血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)的水平,了解大鼠腎功能情況。
　　 3、觀察7d組大鼠生存率情況。<

7、br>　　 4、采用ELISA法檢測不同時間血清和(或)腎組織中腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細(xì)胞介素(IL-1β)、IL-6、IL-8和IL-10的水平變化,以及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、髓過氧化物酶(MPO)的水平變化。
　　 5、采用HE染色觀察病理變化以及做免疫組化分析腎臟組織PECAM-1和P-選擇素表達(dá)情況,用Western blotting方法檢測ICAM-1和PECAM-1相關(guān)粘附分子在蛋白水

8、平表達(dá)的變化；
　　 6、流式細(xì)胞技術(shù)檢測中性粒細(xì)胞CD11b、CD54和CD62L的表達(dá)情況。
　　 7、應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析處理。
　　 結(jié)果：
　　 1.與Sham組相比較,大鼠I/R組及DOSM自灌注后3h起B(yǎng)UN和Cr水平均明顯升高,并于48h時升高達(dá)高峰,兩組比較顯示DOSM組腎功能水平優(yōu)于I/R模型組(P<0.05或P<0.001)。
　　 2.7d組生存率觀察

9、發(fā)現(xiàn),I/R術(shù)后56h～96h為大鼠死亡高峰期,中位生存時間為87h,1周生存率為40％,而DOSM組96h為死亡高峰期,觀察1周生存率為75％,明顯高于缺血再灌注組,兩組差異有顯著性意義。
　　 3.I/R和DOSM處理組TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、MDA和MPO水平隨病程進(jìn)展而升高,在相同時段I/R和DOSM+I/R組水平均顯著高于SO組(P<0.05或P<0.001),而且I/R水平也顯著高于DOSM處理組

10、(P<0.05或P<0.001)。在I/R組,IL-10、SOD水平隨病程進(jìn)展逐漸降低,DOSM處理組IL-10水平隨病程進(jìn)展逐漸增高。
　　 4.Sham組腎組織結(jié)構(gòu)基本正常,無明顯改變；I/R組可見明顯腎小管上皮細(xì)胞腫脹、變性、壞死、脫離及炎性細(xì)胞浸潤,而在各時相點(diǎn)DOSM組較I/R明顯減輕。
　　 5.ICAM-1、PECAM-1,CD11b、CD54和CD62L的表達(dá)隨病程逐漸增高,DOSM組均低于I/R組,比較