地奧司明(DOSM)對大鼠腎臟缺血再灌注損傷保護作用的實驗研究.pdf

1、缺血再灌注(Ischemia-Reperfusion,I/R)損傷具有種屬、器官的普遍性和廣泛性,涉及多組織、多器官的病理生理改變,臨床上常見于器官移植、術,中血流阻斷、動脈阻塞性疾病治療過程中、休克等情況。腎I/R損傷是臨床上常見的病理生理過程,是引起急性腎功能衰竭的重要原因之一,常常難于避免,特別是在腎臟移植過程,I/R時腎組織細胞發(fā)生一系列功能、代謝和結構的損傷,會導致移植腎功能延遲恢復、術后急慢性排斥反應的發(fā)生率升高及原發(fā)移植腎

2、無功能,從而影響疾病的預后和手術的成敗,是導致再移植和影響病人存活的主要因素之一,有些學者甚至認為I/R損傷對移植腎的影響要超過HLA配型不合。因此如何預防和減輕I/R過程中對腎臟造成的損傷,減少由此而致的急性腎衰、排斥反應及移植腎功能損害仍然是我們面臨且急需解決的重要課題。
　　 腎I/R可引起一系列病理生理改變如血管內皮細胞腫脹和破壞,氧自由基的產生,微血管收縮,血小板及中性粒細胞粘附聚集,血流的降低,特別是氧自由基的改變,

3、可激活相關酶系統(tǒng)引起組織細胞發(fā)生一系列功能、代謝和結構的損傷。
　　 地奧司明(DOSM)具有顯著的抗炎,抗氧化、改善微循環(huán)、抗血栓、調節(jié)免疫等作用逐漸為人們所認識。有研究表明DOSM可減輕小腸I/R損傷及遠隔臟器的次級損傷,可減輕骨骼肌和心臟I/R的損傷。理論上將DOSM的大部分重要生物效應正好針對腎IRI的發(fā)生、發(fā)展中起關鍵作用的一些生物學機制,很可能對腎I/R損傷的重要發(fā)病環(huán)節(jié)起抑制作用。
　　 目的：本研究以阻斷

4、大鼠腎蒂血管的方式,造成大鼠實驗性缺血再灌注模型,觀察DOSM預處理對實驗性大鼠腎I/R損傷的保護作用,并探討其可能的保護作用機制,為臨床上移植器官缺血再灌注損傷及由此導致的急性腎功能衰竭等提供新的治療方法,為DOSM更廣闊的臨床新用途提供實驗依據(jù)和理論基礎。
　　 方法：
　　 1、實驗對象為健康雄性SD大鼠230只,體重200±20g,隨機分為3組:假手術組(Sham組)、缺血再灌注模型組(I/R組)、DOSM預處理

5、組(DOSM組)。DOSM處理組大鼠采用術前DOSM80mg/kg,每日灌胃兩次連續(xù)10天給藥,Sham組和I/R組大鼠均采用5％阿拉伯膠每日灌胃兩次,連續(xù)10天給藥。動物模型制作:戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后,無損傷微動脈夾夾閉左側腎蒂50分鐘后解除血管阻斷開放血流,觀察到腎臟在短時間內由暗黑色逐漸轉變?yōu)轷r紅色表示再灌注成功；開放前2min切除右側腎臟,建立大鼠急性腎缺血再灌注損傷動物模型。假手術組僅作麻醉、開腹,不夾閉左腎動脈,直接切除

6、一側腎臟,其他操作同模型組。DOSM預處理組操作與I/R模型組相同。術后12h、24h、48h和7d各時相點組繼續(xù)給予術前原用藥方案連續(xù)用藥處理,直至觀察終點。分別于腎臟恢復血流后1h、3h、6h、12h、24h、48h和7d留取血和腎組織標本。
　　 2、采用全自動生化分析儀,分別測定3h、12h、24h、48h和7d血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)的水平,了解大鼠腎功能情況。
　　 3、觀察7d組大鼠生存率情況。<

7、br>　　 4、采用ELISA法檢測不同時間血清和(或)腎組織中腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細胞介素(IL-1β)、IL-6、IL-8和IL-10的水平變化,以及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、髓過氧化物酶(MPO)的水平變化。
　　 5、采用HE染色觀察病理變化以及做免疫組化分析腎臟組織PECAM-1和P-選擇素表達情況,用Western blotting方法檢測ICAM-1和PECAM-1相關粘附分子在蛋白水

8、平表達的變化；
　　 6、流式細胞技術檢測中性粒細胞CD11b、CD54和CD62L的表達情況。
　　 7、應用SPSS15.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析處理。
　　 結果：
　　 1.與Sham組相比較,大鼠I/R組及DOSM自灌注后3h起B(yǎng)UN和Cr水平均明顯升高,并于48h時升高達高峰,兩組比較顯示DOSM組腎功能水平優(yōu)于I/R模型組(P<0.05或P<0.001)。
　　 2.7d組生存率觀察

9、發(fā)現(xiàn),I/R術后56h～96h為大鼠死亡高峰期,中位生存時間為87h,1周生存率為40％,而DOSM組96h為死亡高峰期,觀察1周生存率為75％,明顯高于缺血再灌注組,兩組差異有顯著性意義。
　　 3.I/R和DOSM處理組TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、MDA和MPO水平隨病程進展而升高,在相同時段I/R和DOSM+I/R組水平均顯著高于SO組(P<0.05或P<0.001),而且I/R水平也顯著高于DOSM處理組

10、(P<0.05或P<0.001)。在I/R組,IL-10、SOD水平隨病程進展逐漸降低,DOSM處理組IL-10水平隨病程進展逐漸增高。
　　 4.Sham組腎組織結構基本正常,無明顯改變；I/R組可見明顯腎小管上皮細胞腫脹、變性、壞死、脫離及炎性細胞浸潤,而在各時相點DOSM組較I/R明顯減輕。
　　 5.ICAM-1、PECAM-1,CD11b、CD54和CD62L的表達隨病程逐漸增高,DOSM組均低于I/R組,比較