馬急性蹄葉炎下基質(zhì)金屬蛋白酶變化的研究.pdf

1、本試驗研究全身循環(huán)系統(tǒng)中的基質(zhì)金屬蛋白酶-1(MMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)、集硅酶-1、P38絲裂原活化蛋白激酶(P38 MAPK)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及一種基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(TIMP-2)在低聚果糖誘導(dǎo)的急性蹄葉炎模型中的濃度變化趨勢，試圖探討其在蹄葉炎發(fā)生發(fā)展過程中的作用，為急性蹄葉炎早期快速診斷及預(yù)警提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)。
　　將21匹馬隨機分為實驗組(n

2、=12)和對照組(n=9)，把10g/kg體重的低聚果糖溶解在6L蒸餾水中，用鼻胃管給試驗組的馬灌服，同時，給對照組灌服6L蒸餾水。從0h到72h期間，每隔四個小時用抗凝采血管采集靜脈血5ml，將收集的血液3000r/min離心10分鐘，分離血漿，保存在-80℃。用酶聯(lián)免疫吸附試驗測量各生物指標(biāo)。每次采血后都對體況和跛行程度進行檢查。在跛行達到三級的時候?qū)μ悴颗臄zX光片。將一匹跛行程度達到3級的馬處死，取其蹄部，從蹄部縱軸剖開，小心去掉

3、其第三指骨，暴露蹄葉層，將蹄葉層小心剝離蹄殼，馬蹄葉層本身大約0.2cm厚，只需將其切成2.0cm×2.0cm的小塊，放入福爾馬林溶液中保存。
　　12匹試驗組的馬，有11匹表現(xiàn)出跛行癥狀。對照組沒有馬在試驗期間表現(xiàn)出跛行。灌服低聚果糖后8-20h，試驗組相繼出現(xiàn)一級跛行癥狀;20-56h期間相繼出現(xiàn)二級跛行癥狀，個別表現(xiàn)出三級跛行的癥狀。另外，體溫最低在0h，是37.6±0.2℃，最高出現(xiàn)在40h，是39.3±0.8℃。在二級跛

4、行出現(xiàn)期間，呼吸率從17.4±1.8次/min增加到25±2.8次/min，同時，心率從49±2.1次/min增加到64±4.2次/min。所有灌服低聚果糖的馬在12-24h期間均相繼出現(xiàn)腹瀉的癥狀，臨床癥狀嚴(yán)重的馬還表現(xiàn)出羞明流淚和明顯的酸中毒癥狀。所有臨床癥狀均在60h后緩解。實驗組中的MMP-1、MMP-2、MMP-9、集硅酶-1、P38 MAPK和TNF-α均表現(xiàn)為先升高，而TIMP-2則變現(xiàn)出下降的趨勢，各指標(biāo)在68h后均恢復(fù)

5、到對照組水平。MMP-1的濃度在12h開始顯著升高，一直持續(xù)到28h，在24h出現(xiàn)峰值，峰值為37.96±4.91ng/ml，與對照組相比差異性顯著(P＜0.05)，在32h后回落;MMP-2的濃度變化趨勢整體呈現(xiàn)波浪式，在8h達到峰值，為21.44±3.06ng/ml，且與對照組相比差異顯著（P＜0.05）;MMP-9的濃度在8h開始顯著升高，持續(xù)到48h，時峰值出現(xiàn)在28h，為199.37±25.39ng/ml，與對照組比較差異性顯

6、著(P＜0.05); TIMP-2的濃度整體呈現(xiàn)下降的趨勢，從第8h一直持續(xù)到64h，并在16h達到最低值，36.40±4.53ng/ml，與對照組相比差異顯著（P＜0.05）;集硅酶-1的濃度在16h開始顯著升高，持續(xù)到56 h，在48 h出現(xiàn)峰值，峰值為15.11±1.50 ng/ml，與對照組比較差異性顯著(P＜0.05); P38MAPK的濃度變化趨勢大體上是先升高后降低，從第8h開始升高，一直持續(xù)到68h，在16h達到峰值46

7、.44±10.36ng/ml，與對照組比較差異性顯著(P＜0.05); TNF-α的濃度變化趨勢僅出現(xiàn)一個峰，從16h一直持續(xù)到28h，在24h處出現(xiàn)峰值150.15±13.19ng/ml，與對照組相比差異性顯著（P＜0.05）。
　　結(jié)果表明，低聚果糖誘導(dǎo)的急性蹄葉炎模型中，血液MMP-1、MMP-2、MMP-9、TIMP-2、集硅酶-1、P38 MAPK和TNF-α的濃度變化趨勢符合蹄葉炎發(fā)病變化趨勢;MMP-2在低聚果糖誘導(dǎo)