日糧營養(yǎng)水平對山羊前胃上皮Na+-H+交換蛋白及氨轉(zhuǎn)運蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、本研究包括兩個部分:1、日糧對山羊瓣胃上皮Na+/H+交換蛋白表達(dá)的影響及其機制;2、日糧對山羊瘤胃和瓣胃上皮氨轉(zhuǎn)運蛋白表達(dá)的影響及其機制。
　　系列一:日糧對山羊瓣胃上皮Na+/H+交換蛋白表達(dá)的影響及其機制
　　本系列分為兩個試驗，試驗一：日糧對山羊瓣胃上皮Na+/H+交換蛋白表達(dá)影響的體內(nèi)研究。
　　選取青年波雜山羊34頭用于本試驗研究，分別進(jìn)行兩個試驗試驗一和試驗二，在兩個試驗中山羊均被分為兩組:PNSC組和P

2、NS組，兩組山羊均自由采食花生稈和飲水，且PNSC組山羊在每天分四次分別飼喂精料100g。飼喂持續(xù)42天，試驗一的山羊在第43天禁食16h后屠宰取樣，而試驗二的山羊在第43天采食后2h屠宰取樣。山羊屠宰后檢測表明，在禁食和連續(xù)飼喂條件下，PNSC組山羊瓣胃液的SCFA顯著高于PNS組，而pH則顯著低于PNS組;Real-time PCR和Western-blot結(jié)果顯示，試驗一在禁食條件下PNSC組山羊瓣胃上皮Na+/H+交換蛋白NHE

3、1基因和蛋白的表達(dá)水平顯著高于PNS組;NHE2和NHE3基因和蛋白的表達(dá)水平在PNSC組與PNS組間均沒有差異;試驗二在連續(xù)飼喂條件下，PNSC組山羊瓣胃上皮NHE1基因和蛋白的表達(dá)水平顯著高于PNS組，而NHE2和NHE3基因和蛋白的表達(dá)水平在兩組間沒有差異。
　　試驗二：SCFA和pH對原代培養(yǎng)山羊瓣胃上皮細(xì)胞Na+/H+交換蛋白表達(dá)影響的體外研究。
　　體外試驗選取4只健康山羊，屠宰后采集瓣胃上皮樣品用于細(xì)胞培養(yǎng)，用

4、胰蛋白酶消化獲得單個瓣胃細(xì)胞后進(jìn)行原代培養(yǎng)，24 h細(xì)胞附著后，分別用高SCFA和低pH處理細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)24 h后收集細(xì)胞檢測。利用Real-time PCR和Western-blot的方法檢測體外培養(yǎng)的山羊瓣胃上皮細(xì)胞。體外研究顯示，SCFA顯著上調(diào)原代培養(yǎng)山羊瓣胃上皮細(xì)胞NHE1基因和蛋白的表達(dá)，低pH對其基因和蛋白的表達(dá)沒有影響;升高SCFA、降低pH或SCFA和pH共處理顯著下調(diào)山羊瓣胃上皮細(xì)胞NHE2和NHE3基因和蛋白的表

5、達(dá)。
　　系列二:日糧對山羊瘤胃和瓣胃上皮氨轉(zhuǎn)運蛋白表達(dá)的影響及其機制
　　本系列分為兩個試驗，試驗一：日糧營養(yǎng)水平對山羊瘤胃和瓣胃上皮氨轉(zhuǎn)運蛋白mRNA表達(dá)影響的體內(nèi)研究
　　選取15頭波爾山羊用于本實驗研究，實驗將山羊隨機分為高營養(yǎng)組(HL組)和低營養(yǎng)組(LL組)。高營養(yǎng)組每次飼喂精料327g，羊草78.48g，苜蓿30.52g，低營養(yǎng)組每次飼喂羊草348.8g，苜蓿69.76g，預(yù)混料17.44g，每天飼喂兩次，

6、經(jīng)過一段時間的精料添加，最終低營養(yǎng)組每頓飼喂羊草390.47g，苗蓿78.09g，預(yù)混料17.44g，高營養(yǎng)組每頓飼喂精料700g，羊草171g，苜蓿68g，飼喂兩周后屠宰。體內(nèi)結(jié)果顯示，HL組山羊瘤胃液和瓣胃液的SCFA含量顯著升高，而pH顯著降低;HL組山羊瘤胃液中氨氮的濃度顯著升高，瓣胃液中的氨氮濃度在兩組間沒有差異;山羊瘤胃與瓣胃上皮中氨轉(zhuǎn)運蛋白Rhbg和Rhcg mRNA的表達(dá)水平在HL組均顯著高于LL組。
　　試驗二：

7、SCFA和pH及含氮化合物對原代培養(yǎng)山羊瘤胃和瓣胃上皮細(xì)胞氨轉(zhuǎn)運蛋白mRNA表達(dá)影響的體外研究
　　體外試驗選取4只健康山羊，屠宰采集瘤胃和瓣胃上皮樣品后用于細(xì)胞培養(yǎng)，胰蛋白酶消化獲得單個瘤胃和瓣胃細(xì)胞后進(jìn)行原代培養(yǎng)，24 h細(xì)胞附著后，分別用pH、SCFA、NH4Cl和Urea處理，繼續(xù)培養(yǎng)24 h后收集細(xì)胞用于檢測。利用Real-time PCR方法檢測體外培養(yǎng)的山羊瘤胃和瓣胃上皮細(xì)胞。體外研究顯示，低pH顯著上調(diào)原代培養(yǎng)山羊