DATS對HL-60細胞NADPH氧化酶活性的影響及機制.pdf

1、南華大學碩士學位論文DATS對HL60細胞NADPH氧化酶活性的影響及機制姓名：田志臻申請學位級別：碩士專業(yè)：病理學與病理生理學指導教師：唐圣松200705012DATS對HL60細胞NADPH氧化酶活性的影響及機制中文摘要目的：目的：研究DATS對HL60細胞NADPH氧化酶活性的影響及機制，尋找DATS誘導ROS產生的靶點，為抗腫瘤治療提供新的靶點。方法：方法：硝基四氮唑藍（NBT）還原實驗檢測NADPH氧化酶活性；RTPCR檢測N

2、ADPH氧化酶亞基mRNA(gp91phoxp47phoxp22phoxRac2和Rac1)的表達Westernblot檢測蛋白(p67phoxgp91phox和Rac2)表達變化。結果：結果：DATS處理HL60細胞1小時，NBT還原反應陽性率與對照組相比差異無顯著性(P0.05)；DATS處理HL60細胞3小時，NBT還原反應陽性率呈濃度依賴性增加150μM為峰值；DATS處理HL60細胞6小時，NBT還原反應陽性率在100μM達到

3、峰值，之后濃度依賴性下降；處理12小時后與對照組相比差異無顯著性(P0.05)。DATS能誘導HL60細胞內NADPH氧化酶復合物成分mRNA（gp91phoxp47phoxp22phoxRac2和Rac1）和蛋白（Rac2和gp91phox）的表達，這種誘導效應有時間和濃度依賴性。用150μMDATS處理HL60細胞0h－12hNADPH氧化酶各亞基mRNA表達水平，在1小時開始升高，在3小時達到峰值；NADPH氧化酶亞基Rac2和g

4、p91phox蛋白表達在3小時達到高峰，亞基p67phox的蛋白表達與對照組相比無明顯變化。用不同濃度的DATS處理HL60細胞3小時，mRNA（gp91phoxp47phoxp22phoxRac2和Rac1）表達在DATS濃度為150μM達到峰值。Rac2和gp91phox亞基蛋白表達有濃度依賴性，p67phox蛋白表達與對照組相比無明顯變化。DATS處理HL60細胞后引起NADPH氧化酶Rac2和p67phox的轉位。DATS處理H

5、L60細胞后，p67phox亞基和Rac2亞基在胞漿中的含量降低，而在膜中的含量升高，Rac2和p67phox在DATS處理后從胞漿轉位到胞膜，并且這種變化有時間依賴性和濃度依賴性，用150μMDATS處理HL60細胞0h－12hWesternblot結果顯示：Rac2和p67phox的轉位在3h時達高峰（P0.05）。用不同濃度的DATS處理HL60細胞3小時，Westernblot結果顯示Rac2和p67phox的轉位時間依賴性的增