Latexin對胰腺癌干細(xì)胞生長及其bcl-2、c-myc表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　 1.分選出人胰腺癌干細(xì)胞及體外培養(yǎng)。
　　 2.研究latexin、bcl-2、c-myc在人胰腺癌細(xì)胞及人胰腺癌干細(xì)胞中的表達(dá)差異，初步探討其可能的生物學(xué)作用。
　　 3.研究latexin對人胰腺癌干細(xì)胞生長及其bcl-2、c-myc表達(dá)的影響，探討其生物學(xué)作用及分子機(jī)制。
　　 方法:
　　 1.應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry，F(xiàn)CM)測量不同人胰腺癌細(xì)胞株（As

2、pc-1、Panc-1、Miapaca-2、Bxpc-3、Patu8988）中CD133+細(xì)胞含量。
　　 2.應(yīng)用磁激活細(xì)胞分選術(shù)(magnetic activated cell sorting，MACS)分選出人胰腺癌細(xì)胞株Miapaca-2中CD133+細(xì)胞，用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)評價分選效率。
　　 3.應(yīng)用Western blot及qRT-PCR檢測CD133、latexin、bcl-2、c-myc在Miapa

3、ca-2CD133+與CD133-細(xì)胞中表達(dá)。
　　 4.運用CCK-8法檢測不同濃度latexin(5ng/ul、10ng/ul、20ng/ul、40ng/ul)分別作用24小時、48小時后Miapaca-2 CD133+細(xì)胞的增殖情況。
　　 5.將分選的Miapaca-2 CD133+細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中與不同濃度的latexin(0ng/ul、5ng/ul、10ng/ul、40ng/ul)共培養(yǎng)48小時，應(yīng)用We

4、stern blot及qRT-PCR檢測bcl-2、c-myc等增殖、凋亡相關(guān)基因表達(dá)改變。
　　 結(jié)果:
　　 1.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，CD133在Panc-1、Miapaca-2、Aspc-1中含量分別為(1.24±0.31)％、(1.18±0.23)％、(1.75±0.45)％，在Bxpc-3、Patu8988中幾乎不表達(dá)。
　　 2.成功地從人胰腺癌細(xì)胞株Miapaca-2中分選出CD133+細(xì)胞，分選效

5、率為(94.95±0.55)％。
　　 3.Western blot，qRT-PCR檢測顯示，latexin、c-myc在Miapaca-2 CD133+細(xì)胞中表達(dá)明顯低于CD133-細(xì)胞（P＜0.05）;Bcl-2在胰腺癌CD133+細(xì)胞中的表達(dá)明顯高于CD133-細(xì)胞(P＜0.05)。
　　 4.CCK-8結(jié)果顯示，不同濃度的latexin均能抑制Miapaca-2 CD133+細(xì)胞增殖，呈現(xiàn)濃度和時間依賴性，隨著藥

6、物濃度的增加或作用時間的延長，抑制率增加(均P＜0.05)。
　　 5.Western blot及qRT-PCR檢測顯示，latexin使Miapaca-2 CD133+細(xì)胞bcl-2、c-myc蛋白及mRNA表達(dá)下降，而bax mRNA表達(dá)則增加（均P＜0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1.人胰腺癌細(xì)胞株中含少量的腫瘤干細(xì)胞，latexin、c-myc在胰腺癌腫瘤干細(xì)胞中表達(dá)低于普通胰腺癌細(xì)胞，而bcl-2則相