用BRL條件培養(yǎng)基分離克隆雞胚胎干細(xì)胞及誘導(dǎo)分化.pdf

1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文用BRL條件培養(yǎng)基分離克隆雞胚胎干細(xì)胞及誘導(dǎo)分化姓名：孟春花申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：動(dòng)物遺傳育種與繁殖指導(dǎo)教師：杜立新20050501BRL條件培養(yǎng)基分離克隆雞胚胎干細(xì)胞及誘導(dǎo)分化酶消化相結(jié)合的方法。CES細(xì)胞克隆培養(yǎng)過程中，如果傳代不及時(shí)，或在無飼養(yǎng)層、無分化抑制因子的條件下，ES細(xì)胞可自發(fā)分化為成纖維樣細(xì)胞、脂肪樣細(xì)胞、肌肉樣細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞樣細(xì)胞等多種類型的細(xì)胞。懸浮培養(yǎng)時(shí)，CES細(xì)胞可形成囊胚樣結(jié)構(gòu)。CES

2、細(xì)胞在10。5M一104M全反式維甲酸(a11transretinoicacid，ATRA)和0001％一01％DMSO的誘導(dǎo)定向分化為神經(jīng)細(xì)胞。誘導(dǎo)后2h，部分細(xì)胞胞體收縮變圓，隨誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)神經(jīng)元樣細(xì)胞伸出樹枝狀突起，數(shù)目增多，突起增長(zhǎng)，互相交叉形成網(wǎng)絡(luò)。RA誘導(dǎo)后第8d的細(xì)胞經(jīng)免疫組化鑒定GFAP表達(dá)陽性。在天麻素的誘導(dǎo)下，分散的CES細(xì)胞在36h內(nèi)分化為神經(jīng)樣細(xì)胞。誘導(dǎo)4d后逐漸增多的細(xì)胞互相交叉，形成網(wǎng)絡(luò)。于誘導(dǎo)后第7d經(jīng)免

3、疫組化鑒定，大量的細(xì)胞GFAP表達(dá)陽性。天麻素誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞在體外存活25d以上。將操作后的胚盤孵化至出雛是充分利用ES細(xì)胞的另一重要技術(shù)。本研究采用以下方法：操作前將種蛋鈍端向上放置5d，鈍端開小口，滴加PBS，打開蛋殼內(nèi)膜，顯微注射入供體細(xì)胞后原蛋殼培養(yǎng)并用蛋殼封口。孵化條件為前3d采用382℃、Im50％、每小時(shí)90。角翻蛋，3d以后采用378℃、RH60％、每小時(shí)300角翻蛋孵化至21d，得到了最高45％的孵化率。關(guān)鍵詞：BRL