小鼠與豬胚胎干細胞分離培養(yǎng).pdf

1、胚胎干細胞是一類具有在體外無限自我復制和分化為體內任何種類細胞的多潛能細胞。目前，公認的胚胎干細胞全能性判斷標準包括：體內、體外向三胚層細胞分化和二倍體嵌合后能進入生殖脊。從1981年KaufmanMH等第一次分離小鼠胚胎干細胞至今，能滿足這些標準的只有小鼠、大鼠和雞的胚胎干細胞系。豬是重要的人類疾病模型動物、藥物實驗模型動物，同時還是人類異種器官移植的主要候選供體，其胚胎干細胞系的建立也一直受到廣泛的關注，但是迄今為止真正的豬胚胎干細

2、胞系（即滿足上述判定標準）還未被建立起來。
　　 本實驗首先采用改進的方法建立了小鼠胚胎干細胞系，然后以小鼠胚胎干細胞系建立的技術體系為基礎，通過對豬早期胚胎發(fā)育的研究，對豬胚胎干細胞的建系技術以及分離得到真正豬胚胎干細胞的可能性等問題進行了探討。主要的實驗方法和實驗結果如下：
　　 第一部分用KOSR胚胎干細胞培養(yǎng)液與FBS胚胎干細胞培養(yǎng)液結合的方式進行了ICR品系小鼠ESC的分離建系。結果表明，這種改進的建系方法不但

3、可以用ICR品系小鼠的囊胚分離胚胎干細胞系，而且建系的效率高達71.4％。我們對得到的胚胎干細胞系中的一株進行了多能性的檢測，實驗數據表明該細胞系滿足小鼠胚胎干細胞的鑒定標準。
　　 第二部分我們對豬早期胚胎進行了收集、形態(tài)觀察、直徑測量等實驗。通過實驗，我們收集了關于豬早期胚胎發(fā)育的一些數據，統計數據表明，豬早期胚胎的胎齡和其直徑大小具有正相關的聯系；同一批次的胚胎之間發(fā)育不同步的現象比較普遍，所以用胎齡對豬早期胚胎進行籠統的