美味獼猴桃根保肝活性及成分的研究.pdf

1、美味獼猴桃(A.．deliciosa C F. lianget A R．Fetguson)為獼猴桃科獼猴桃屬植物，廣泛分布在亞洲各國，其果實有其很好的營養(yǎng)和醫(yī)藥價值。其根在民間常用于治療肝炎、水腫、跌打損傷、風(fēng)濕關(guān)節(jié)等病。已有資料表明美味獼猴桃根的乙醇粗提物在體內(nèi)外有抗腫瘤作用，但對其根的提取物是否有保肝作用及保肝的主要成分尚未見詳細(xì)的報道，本文研究其根保肝作用活性成分，對其根的保肝作用提供有力的科學(xué)依據(jù)，對于闡明其根保肝作用、開發(fā)新型

2、保肝藥品有重要的學(xué)術(shù)意義和實踐價值。 本文主要利用四氯化碳(CCl<,4>)肝損傷模型來跟蹤各提取物的保肝活性，利用硫氰酸鐵(FTC)法進(jìn)行脂質(zhì)的過氧化實驗，并對分離純化各部分進(jìn)行跟蹤研究。在對提取溶劑和提取方法的篩選中表明，乙醇提取物抗氧化和保肝活性均大于其它提取物的活性(P<0.05)；并證明了其作用效果與加入劑量呈一定的相關(guān)性，當(dāng)乙醇提取物的用量達(dá)120 mg/kg時，CCl<,4>損傷的小鼠血清中的丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)

3、、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性相對于模型組分別降低65.67％和85.53％，脂質(zhì)過氧化水平(MDA)降低52.26％，還原型谷光甘肽(GSH)升高55.83％；其作用效果也被肝的組織病理學(xué)檢查所確認(rèn)。不同的提取方法所得的提取物均有顯著的抗氧化性能和對CCl<,4>肝損傷小鼠的保肝作用(p<0.01)；但是微波提取速度快，溶劑用量少，不影響提取物的保肝活性。 將獼猴桃根乙醇提取物采用不同極性的溶劑分級萃取，分別采用抗氧化性試驗和

4、CCl<,4>肝損傷試驗進(jìn)行活性測定。結(jié)果表明：乙酸乙酯萃取物(FrA)和正丁醇萃取物(FrB)具有較高的抗氧化性能和保肝活性(p<0.05)。 建立了TLC-分光光度法測定總?cè)坪亢蚑LC-HPLC法測定提取物中齊墩果酸(oleanolic acid)含量的方法。找到了薄層色譜分離三萜的適宜展開劑組成為：氯仿+甲醇+水(70+30+1)，最佳的顯色劑為200 ml/L硫酸甲醇溶液+15 g/L的香草醛甲醇溶液(1+1)的混合

5、液。分光光度法測定總?cè)频倪m宜條件為：50 g/L香草醛醋酸溶液0.3 ml，高氯酸1 ml，60℃反應(yīng)15 min，測定波長540 nm；HPLC測定提取物中的oleanolic acid含量的適宜的條件為： LunaC<,18>柱，流動相：乙腈+甲酸+水(60+0.08+39.92)，流速1.0ml/min，UV檢測，檢測波長206 nm，進(jìn)樣量10μl。經(jīng)驗證，兩種方法都具有較高的精密度、準(zhǔn)確性及可靠性。對各分級提取物分析表明，F(xiàn)

6、rA和FrB中的主要成分為三萜化合物。 采用改進(jìn)的實驗室微波新裝置，對提取獼猴桃根中的總?cè)频墓に囘M(jìn)行了研究。并用響應(yīng)面法優(yōu)化出最佳的提取工藝條件為：微波功率450 W下，獼猴桃根粉碎度40目，微波處理前浸泡30 min，料液比1:15，乙醇體積分?jǐn)?shù)63％，提取溫度47℃，提取時間30 min，在此條件下總?cè)埔淮翁崛÷士蛇_(dá)85.13％。并進(jìn)行了驗證實驗。采用大孔樹脂對三萜化合物進(jìn)行了純化。通過對五種樹脂的篩選實驗，確定了D10

7、1作為純化獼猴桃根中總?cè)苹衔锏臉渲?。建立了D101靜態(tài)吸附總?cè)频膭恿W(xué)方程，確立了D101純化總?cè)苹衔锏暮线m工藝條件。樹脂純化后總?cè)萍兓稊?shù)達(dá)到1.78倍，總?cè)频幕厥章蔬_(dá)到88.65％。經(jīng)TLC檢識，樹脂純化后的產(chǎn)品中主要成分(其R<,f>值為0.87、0.82、0.75、0.67、0.51、0.42、0.26)包含了乙酸乙酯和正丁醇萃取物中的主要成分。 采用硅膠柱層析對樹脂純化總?cè)七M(jìn)一步的分離和活性測定。結(jié)果表

8、明：氯仿+甲醇(7+3～6+4)的洗脫液Fr(3)部分具有較高的抗氧化和保肝活性。經(jīng)TLC檢識，F(xiàn)r(3)顯示四個主要的點(diǎn)(其R<,f>值為0.87、0.82、0.75、0.67)和幾個小點(diǎn)。這些點(diǎn)的R<,f>值與乙酸乙酯和正丁醇萃取物中的主要三萜成分相同，說明他們是保肝活性的主要單體化合物。 采用Sephadex-LH-20柱和ODS柱對單體化合物多次分離純化。結(jié)果得到四個單體化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ。其R<,f>值分別為0.87

9、、0.82、0.75、0.67。通過采用UV、MS、<'1>HNMR．<'13>C NMR和DEPT-NM等方法進(jìn)行分析，結(jié)構(gòu)鑒定，它們分別為齊墩果酸(oleanolicacid)、熊果酸(ursolic acid)、2α,3α,23-三羥基-12-烯-28-烏蘇酸(2α，3α，23-trihydroxy-urs-12-en-28-oic acid)、2α,3β，19,23-四羥基-12-烯-28-烏蘇酸(2α,3β，19,23-tet