人端粒保護蛋白1(hPOT1)表達水平減低與冠狀動脈粥樣硬化病變的發(fā)生相關(guān).pdf

1、研究目的:
　　 目前關(guān)于冠狀動脈粥樣硬化發(fā)生機制的研究有多種學(xué)說，其中端粒學(xué)說是近幾年分子生物學(xué)領(lǐng)域研究的熱點，但關(guān)于人端粒保護蛋白1(hPOT1)與冠狀動脈粥樣硬化發(fā)生機制關(guān)系的研究國內(nèi)外仍未見報道。hPOT1是唯一能夠與端粒末端單鏈DNA結(jié)合的蛋白，其在細胞分裂、調(diào)控端粒的長度、端粒末端的保護、端粒酶功能的維持及染色體的穩(wěn)定等方面發(fā)揮著非常重要的作用，本研究旨在探討冠心病患者hPOT1表達水平的改變與冠狀動脈粥樣硬化發(fā)生及

2、其各易患因素之間的關(guān)系。
　　 方法:
　　 1.實驗對象的選擇
　　 選取住院患者共79例，利用冠狀動脈造影術(shù)，將造影結(jié)果顯示一支或以上血管直徑狹窄超過50％的患者確定為冠心病組，共有49例;將無明顯冠狀動脈狹窄的患者確定為對照組，共有30例。兩組研究對象均統(tǒng)計身高、體重、血壓、血糖、血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)等資料。
　　

3、 2.各指標測量標準
　　 入院后測量次日清晨空腹血糖、血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)等與冠狀動脈粥樣硬化發(fā)生關(guān)系密切的指標。于次日清晨病人清醒后且未進行任何肢體活動時測定兩次左上肢血壓，取收縮壓(SBP)的平均值作為血壓指標。身高、體重的最小測量單位分別為1cm和0.5kg，按照公式體重(kg)/身高(m)2計算出體重指數(shù)。
　　 3.實驗方法

4、
　　 提取冠心病組及對照組研究對象空腹外周靜脈血，分離出血漿及白細胞，并進一步提取白細胞內(nèi)總蛋白和mRNA，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附方法(ELISA)測定血漿及細胞內(nèi)hPOT1水平。將mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，hPOT1的特異引物用Premer5.0設(shè)計，以β-actin基因做為內(nèi)參照，實時熒光定量PCR檢測hPOT1的基因水平表達量。
　　 4.統(tǒng)計學(xué)處理
　　 實驗數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料

5、以均值±標準差（（x）±s）表示，計量資料間比較采用t檢驗;直線相關(guān)(Person相關(guān))分析用以研究兩變量之間的相關(guān)性;多因素Logistic回歸分析（前進法）用以研究hPOT1表達量及冠心病各危險因素與冠心病發(fā)生的關(guān)系，其中各自變量進入和剔除的概率標準分別為0.05和0.1;以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)在外周靜脈血白細胞內(nèi)檢測到hPOT1，但在血漿內(nèi)未檢測到，

6、表明在冠狀動脈粥樣硬化的病理生理條件下，hPOT1依然主要定位于細胞內(nèi)，在細胞核內(nèi)結(jié)合于端粒末端發(fā)揮作用。
　　 2.冠心病組研究對象白細胞內(nèi)hPOT1的蛋白表達量較對照組研究對象顯著減低(P＜0.05）。
　　 3.冠心病組研究對象hPOT1 mRNA表達水平較對照組研究對象顯著減低(P＜0.01)。
　　 4.直線相關(guān)分析顯示在基因及蛋白質(zhì)水平上，hPOT1的表達量與冠心病及其各易患因素均顯著相關(guān)，且均成負相

7、關(guān)（P＜0.05）;多因素Logistic回歸分析顯示hPOT1的表達水平減低促進了冠狀動脈粥樣硬化的發(fā)生（P＜0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1.無論從基因水平或是蛋白質(zhì)水平研究，冠狀動脈粥樣硬化患者hPOT1表達水平較健康人群表達量均顯著減低。
　　 2.hPOT1的表達水平減低與冠狀動脈粥樣硬化的發(fā)生及其多種危險因素關(guān)系十分密切。
　　 3.hPOT1的表達水平減低參與了冠狀動脈粥樣硬化的發(fā)病過程