硫化氫對(duì)健康雄性大鼠胃運(yùn)動(dòng)的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：一氧化氮（NO）和一氧化碳（CO）屬于氣體遞質(zhì)，參與多種生理功能的調(diào)節(jié)。硫化氫（H2S）是一種無色具有臭雞蛋氣味的有毒氣體。有研究發(fā)現(xiàn)在人和大鼠的腦、血清、腎臟和肝臟中有相對(duì)高濃度的H2S，這表明：H2S可能在這些組織中發(fā)揮生理作用，H2S可能是除NO和CO外的第三種氣體遞質(zhì)。機(jī)體可以通過胱硫醚β—合成酶（CBS）和胱硫醚γ—裂解酶（CSE）催化L—半胱氨酸產(chǎn)生內(nèi)源性的H2S。而硫氫化鈉（NaHS）作為H2S的外源性供體已經(jīng)廣泛應(yīng)

2、用于H2S的研究當(dāng)中，因?yàn)樵谌芤褐兴軌蚍纸鉃镹a+和HS—，HS—和H+結(jié)合產(chǎn)生H2S。有研究報(bào)道H2S能夠引起腸道平滑肌的舒張，但是機(jī)制尚不確定。RudolfSchicho等發(fā)現(xiàn)在豚鼠和人回腸的腸神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)存在CSE，H2S可能會(huì)通過腸神經(jīng)系統(tǒng)來調(diào)節(jié)胃腸道運(yùn)動(dòng)，但內(nèi)源性。H2S是否調(diào)節(jié)胃的運(yùn)動(dòng)尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖茄芯縃2S對(duì)胃運(yùn)動(dòng)的影響及其可能機(jī)制。 方法：實(shí)驗(yàn)選用健康雄性Wistar大鼠，實(shí)驗(yàn)前禁食12小時(shí)，自由飲水。

3、手術(shù)操作和胃內(nèi)壓記錄2％戊巴比妥鈉（56mg/kg）麻醉大鼠，依次行氣管插管、頸靜脈插管、股動(dòng)脈插管。將一塑料氣囊從食管插入胃腔后固定。氣囊內(nèi)注入生理鹽水使基礎(chǔ)胃內(nèi)壓維持于25mmHg。大鼠自發(fā)胃收縮活動(dòng)穩(wěn)定1個(gè)小時(shí)后，正式開始實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分2組：1）腹腔注射生理鹽水作為對(duì)照組；2）腹腔注射L—Cysteine（12mg/kg）或者NaHS組（5．6mg/kg）?？焖贍奚笫?，取出胃放置于4℃ Krebs液中。沿胃小彎剪開胃腔，沖洗胃腔，

4、再沿胃纖維走向剪取胃體縱行肌肌條（4mm×10mm）。將肌條分別放置在含有5ml krebs液（37℃）的浴槽中孵育，并每隔15分鐘更換一次浴槽中的krebs液。待肌條自發(fā)收縮穩(wěn)定后開始實(shí)驗(yàn)。在整體實(shí)驗(yàn)中，胃的運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度用胃內(nèi)壓來表示，注射藥物前3分鐘的平均胃內(nèi)壓為基礎(chǔ)值（baseline），注射藥物后不同時(shí)間的平均胃內(nèi)壓為效應(yīng)值；在離體肌條實(shí)驗(yàn)中，肌條運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的大小用張力來衡量，加藥前3分鐘的平均張力胃基礎(chǔ)值（baseline），加藥后

5、不同時(shí)間的平均張力為效應(yīng)值；效應(yīng)值與基礎(chǔ)值的比值為統(tǒng)計(jì)指標(biāo)R。所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，采用單因素方差分析和t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，以P<0．05為顯著性差異界值。 結(jié)果：⑴腹腔注射NaHS（5．6 mg/kg）和L—Cysteine（12mg/kg）后，胃內(nèi)壓都迅速出現(xiàn)降低，然后逐漸恢復(fù)正常。⑵低濃度的NaHS（10—4M）不影響胃體縱行肌肌條的收縮活動(dòng)。當(dāng)NaHS的濃度升高至5×10—4M—10—3M時(shí)胃體縱行肌肌條收縮

6、活動(dòng)受到明顯抑制，其中5×10—4M時(shí)抑制作用最強(qiáng)，且在加入NaHS10min時(shí)作用最強(qiáng)，然后逐漸恢復(fù)。⑶ATP依賴性的K+通道（KATP）阻斷劑格列苯脲（glibenclamide）（10—7M）能夠明顯逆轉(zhuǎn)NaHS（10—3M）對(duì)胃體縱行肌肌條收縮活動(dòng)的抑制作用。但是，一氧化氮合酶非特異性阻斷劑N—硝基—L—精氨酸（N—nitro—L—arginine methyl ester，L—NAME）（10—4M）和電壓依賴性的Na+通道阻

7、斷劑河豚毒素（tetrodotoxin，TTX）（10—6M）對(duì)NaHS（10—3M）的這種作用沒有影響。⑷低劑量的L—Cysteine（5×10—4M）對(duì)胃體縱行肌肌條的收縮活動(dòng)沒有影響，當(dāng)劑量增加至（10—3M—5×10—3M）時(shí)，胃體縱行肌肌條的收縮活動(dòng)受到明顯的劑量依賴性的抑制，該作用在加入L—Cysteine后1—2min時(shí)抑制作用最強(qiáng)，10min內(nèi)恢復(fù)正常。⑸河豚毒素（tetrodotoxin，TTX）（10—6M）和M受體

8、阻斷劑阿托品（atropine）（10—6M）都能部分阻斷L—Cysteine（10—3M）對(duì)胃體縱行肌收縮活動(dòng)的抑制作用。但是，N—硝基—L—精氨酸（N—nitro—L—arginine methyl ester，L—NAME）（10—4M）和格列苯脲（glibenclamide）（10—7M）對(duì)L—Cysteine（10—3M）的這種作用沒有影響。⑹CSE特異性抑制劑炔丙基甘氨酸（propargylglycine，PAG）（10—6

9、M—10—3M）和CBS抑制劑氨基—羥乙酸（amino—oxyacetic acid，AOAA）（10—6M—10—5M）增強(qiáng)胃體縱行肌肌條收縮活動(dòng)，且這種增強(qiáng)作用持續(xù)超過30min。⑺PAG（10—6M）和AOAA（10—6M）能夠部分阻斷L—Cysteine（10—3M）對(duì)胃體縱行肌肌條收縮活動(dòng)的抑制，但是不影響NaHS（10—3M）的作用。 結(jié)論：①外源性和內(nèi)源性H2S均抑制胃的運(yùn)動(dòng)。②外源性H2S對(duì)胃運(yùn)動(dòng)的抑制主要是通過