硫化氫后處理對大鼠MIRI的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討硫化氫(H2S)后處理對缺血-再灌注大鼠心肌的保護(hù)作用及可能機(jī)制。
　　方法
　　24只雄性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)(Sham)組、缺血.再灌注(IR)組、H2S后處理(H2S)組，每組8只。以硫氫化鈉(NaHS)作為外源性H2S供體。Sham組：左冠狀動脈前降支(LAD)下掛線，不結(jié)扎，持續(xù)觀察4.5h；IR組：結(jié)扎LAD0.5 h，再灌注4 h，于再灌注前5 min經(jīng)腹腔注射生理鹽水l ml；H2S組：手術(shù)操作同

2、IR組，于再灌注前5 min給予NariS(160μmol/kg)，用生理鹽水稀釋至1 ml后經(jīng)腹腔注射。再灌注結(jié)束后，取左室標(biāo)本備用。采用TUNEL法檢測心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)，RT-PCR法檢測心肌組織HIF-1α和VEGF mRNA表達(dá)，Western blot檢測HIF-1α和VEGF的蛋白表達(dá)。
　　原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)分為5組：正常對照(CON)組，缺氧-復(fù)氧(HR)組，二甲基亞砜(DMSO)組，H2S

3、后處理(H2S)組，LY294002+H2S后處理(LY+H2S)組。以硫氫化鈉(NaHS)作為外源性H2S供體。CON組：將心肌細(xì)胞放入37℃含5％CO2培養(yǎng)箱中孵育4 h。HR組：將心肌細(xì)胞放入37℃含95％N2、5％C02培養(yǎng)箱中，用缺氧液孵育2 h，再換復(fù)氧液在含5％CO2培養(yǎng)箱中孵育2 h。DMSO組：缺氧干預(yù)2 h后，即給予含0.02％DMSO復(fù)氧液孵育30 min，換無DMSO的復(fù)氧液孵育1.5 h。H2S組：缺氧干預(yù)2

4、h后，給予含NaHS(終濃度為40μmol/L)復(fù)氧液孵育30 min，再用無NaHS復(fù)氧液孵育1.5 h。LY+H2S組：缺氧干預(yù)2 h后，給予含LY294002(終濃度為15μmol/L)和NarHS(終濃度為40μmol/L)復(fù)氧液孵育30 min，再用無二者的復(fù)氧液孵育1.5 h。分別收集缺氧前、缺氧2 h和復(fù)氧2 h的細(xì)胞培養(yǎng)液和心肌細(xì)胞備用。MTT法檢測心肌細(xì)胞存活率；測定培養(yǎng)液中CK和LDH活性；流式細(xì)胞學(xué)檢測心肌細(xì)胞凋亡

5、率；Western blot檢測HIF-1α、P-Akt與Akt的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果
　　再灌注末，TUNEL法結(jié)果提示：Sham組、IR組、H2S組心肌組織AI分別為(5.04±0.54)％、(36.39±0.69)％、(17.52±1.02)％。與IR組比較，H2S組AI顯著降低(P<0.01)。RT-PCR結(jié)果提示：與IR組比較，H2S組心肌組織HIF-1α和VEGF mRNA表達(dá)水平明顯增加[(99.67±1.53

6、)％，(100.67±3.51)％，均為P<0.01]。Western blot結(jié)果提示：與IR組比較，H2S組大鼠心肌組織HIF-1α和VEGF蛋白表達(dá)水平亦顯著增加[(78.00±17.35)％，(137.67±15.50)％，分別為P<0.05和P<0.01]。
　　復(fù)氧末，MTT結(jié)果提示：CON組，HR組，DMSO組，H2S組和LY+H2S組心肌細(xì)胞存活率分別為(95.24±1.32)％，(62.03±1.29)％，(60

7、.86±2.12)％，(71.55±1.46)％和(63.65±2.01)％，H2S組心肌細(xì)胞存活率較HR組和LY+H2S組明顯升高(均為P<0.01)。流式細(xì)胞學(xué)結(jié)果提示：CON組，HR組，DMSO組，H2S組和LY+H2S組心肌細(xì)胞凋亡率分別為(6.98±1.33)％，(17.38±2.04)％，(17.48±2.47)％，(10.37±1.51)％和(15.17±1.56)％，H2S組心肌細(xì)胞凋亡率較HR組和LY+H2S組顯著降低

8、(均為P<0.01)。同時(shí)，H2S組培養(yǎng)液中CK與LDH活性較HR組和LY+H2S組明顯降低[(244.99±21.38)U/L，(371.64±18.62)U/L，均為P<0.01]。Western blot結(jié)果提示：H2S組心肌細(xì)胞中HIF-1α和p-Akt蛋白表達(dá)較HR組和LY+H2S組顯著升高[(63.93±4.64)％，(62.59±2.11)％，分別為P<0.05和P<0.01]。
　　結(jié)論
　　H2S后處理對大