血管緊張素Ⅱ1型受體基因的表達調(diào)節(jié)與心肌肥厚及其轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的研究.pdf

1、目的:在 AngⅡ誘導(dǎo)的心肌肥厚大鼠模型上評價 AngⅡ及其受體亞型 AT1在心肌肥厚中的作用,觀察DMP811(AT1拮抗劑)、培哚普利(ACEI)和氨氯地平(鈣通道拮抗劑)對 AngⅡ誘導(dǎo)的心肌肥厚大鼠心肌 AT1基因和心肌肌漿網(wǎng) Ca2+-Mg2+-ATPase基因(SERCA2a)以及Ⅰ型和Ⅲ型膠原基因表達的影響,并對心肌肥厚時 AT1基因、SERCA2a和Ⅰ、Ⅲ型膠原基因表達水平間的相互關(guān)系進行探討,從而為尋找阻滯心肌肥厚的新

2、的有效措施提供一定的理論依據(jù)。方法:1.動物模型的建立:將25只6周齡的SD雄性大鼠隨機分為5組,每組5只.分別給予皮下埋藏裝有生理鹽水或 AngⅡ的滲透微泵。(1)組:生理鹽水輸注(1μl/h)；(2)組:AngⅡ輸注(200ng/kg/min)；(3)組:AngⅡ輸注+DMP811管飼(3 mg/kg/d)；(4)組:AngⅡ輸注+培哚普利管飼(10mg/kg/d)；(5)組:AngⅡ+氨氯地平管飼(10mg/kg/d)。2.一周后

3、稱其體重,處死取其心臟并稱重,采用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)及膠原染色的方法分別檢測心肌。3.偏振光顯微鏡下觀察心肌超微結(jié)構(gòu)變化。4.統(tǒng)計學(xué)處理:應(yīng)用 SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù),數(shù)據(jù)以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,采用方差分析或多個樣本兩兩均數(shù)的比較法,P<0.05表示有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1.輸注 AngⅡ7d對大鼠的體重?zé)o明顯影響,但可使大鼠的心重、心重/體重顯著增加。對照組心重650.0±19.6mg,心重/體重3.

4、35±0.02；AngⅡ組的心重744.5±29.0mg,心重/體重3.76±0.03,AngⅡ+DMP811組心重是622.0±20.1mg,心重/體重是3.19±0.01；AngⅡ+培哚普利組心重是611.6±19.8mg,心重/體重3.13±0.01；AngⅡ+氨氯地平組心重627.2±23.0mg,心重/體重是3.2±0.02；AngⅡ組較對照組心重、心重/體重明顯增加(P<0.05)；和AngⅡ+DMP811組、AngⅡ+培哚

5、普利組、AngⅡ+氨氯地平組相比心重及心重/體重也明顯增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),而AngⅡI+DMP811組、AngⅡ+培哚普利組、AngⅡ+氨氯地平組的心重及心重/體重?zé)o顯著差異(P>0.05)。2.對照組膠原Ⅰ、Ⅲ型轉(zhuǎn)錄水平分別是0.493±0.04,0.355±0.06；AngⅡ組膠原Ⅰ、Ⅲ型轉(zhuǎn)錄水平分別是0.602±0.02,0.439±0.04,AngⅡ組膠原Ⅰ、Ⅲ型轉(zhuǎn)錄水平高于對照組,它們分別比對照組增加(2

6、2.1±4.7)％和(23.6±4.9)％(P<0.01)；AngⅡ+DMP811組的Ⅰ、Ⅲ型膠原轉(zhuǎn)錄水平是0.398±0.02,0.269±0.52；AngⅡ+培哚普利組的Ⅰ、Ⅲ型膠原轉(zhuǎn)錄水平是0.439±0.03,0.249±0.03；AngⅡ+氨氯地平組的Ⅰ、Ⅲ型膠原轉(zhuǎn)錄水平是0.431±0.04,0.295±0.03。AngⅡ+DMP811組分別使Ⅰ、Ⅲ型膠原 mRNA降至對照組的(19.3±4.7)％(P<0.05)和(24.

7、2±15.7)％(P<0.05)；AngⅡ+培哚普利組分別使Ⅰ、Ⅲ型膠原 mRNA降至對照組的(11.0±8.7)％(P<0.05)和(29.9±11.7)％(P<0.05)；AngⅡ+氨氯地平組分別使Ⅰ、Ⅲ型膠原 mRNA降至對照組的(34.7±2.5)％和(16.9±10.3)％(P<0.05)。3.對照組 AT1mRNA表達水平4.963±9.55,AngⅡ組 AT1mRNA表達水平16.033±13.73,AngⅡ+DMP811

8、組AT1mRNA表達水平2.41±4.74,AngⅡ+培哚普利組 AT1mRNA表達水平是0.685±0.3,AngⅡ+氨氯地平組 AT1mRNA表達水平是1.198±0.75。AngⅡ組的 AT1 mRNA水平較對照組上調(diào)(84.7±3.5)％(P<0.01),DMP811、培哚普利及氨氯地平與 AngⅡ合用,可以完全阻止 AngⅡ誘導(dǎo)的 AT1 mRNA的轉(zhuǎn)錄上調(diào)。4.對照組的 SERCA2a基因轉(zhuǎn)錄水平是4.018±1.84,An

9、gⅡ組的 SERCA2a基因轉(zhuǎn)錄水平是0.254±0.06,AngⅡ+DMP811組的 SERCA2a基因轉(zhuǎn)錄水平是3.76±2.33,AngⅡ+培哚普利組的 SERCA2a基因轉(zhuǎn)錄水平是4.117±2.64,AngⅡ+氨氯地平組的 SERCA2a基因轉(zhuǎn)錄水平是4.522±4.18。AngⅡ組的 SERCA2a基因轉(zhuǎn)錄水平顯著低于其他組(P<0.01),下調(diào)幅度達對照組(93.7±2.0％,P<0.01)。并且 SERCA2amRNA表

10、達水平與 AT1mRNA表達水平呈負相關(guān)(r=-0.84,P<0.01)。DMP811、培哚普利及氨氯地平與 AngⅡ合用,不僅可以完全阻止AngⅡ誘導(dǎo)的 SERCA2a表達下調(diào),且還有增加 SERCA2a表達的趨勢,但無統(tǒng)計學(xué)顯著性。從偏振光顯微鏡下觀察到 AngⅡ組心?、?、Ⅲ型膠原蛋白沉積也較其他組明顯增加.結(jié)論:AngⅡ通過其1型受體的介導(dǎo),上調(diào)心肌Ⅰ、Ⅲ型膠原基因的表達,AngⅡ?qū)е碌纳鲜龈淖兡鼙籇MP811、培哚普利、氨氯地平