血管緊張素Ⅱ上調(diào)心肌細(xì)胞內(nèi)脂素表達(dá)的受體機(jī)制.pdf

1、目的：脂肪組織不僅是儲(chǔ)存能量的器官，也是一個(gè)重要的內(nèi)分泌器官。脂肪細(xì)胞分泌的一系列血管活性物質(zhì)被稱為脂肪因子，如瘦素(Leptin)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介-6(IL-6)、抵抗素(Resistin)和脂聯(lián)素(Adiponectin)等。脂肪因子在維持機(jī)體正常的能量代謝、炎癥反應(yīng)、血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞功能以及應(yīng)激反應(yīng)等眾多方面發(fā)揮了重要作用。肥胖患者往往因?yàn)橹窘M織堆積，脂肪細(xì)胞體積增大，導(dǎo)致脂肪因子分泌失調(diào)，最終

2、引起動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、冠心病、糖尿病、代謝綜合征等一系列相關(guān)疾病。Sama1等在外周血淋巴細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了一種可以促進(jìn)前B細(xì)胞增殖的蛋白質(zhì)，稱為前B細(xì)胞克隆增強(qiáng)因子(PBEF)。Rongvaux等發(fā)現(xiàn)，PBEF是細(xì)胞質(zhì)中的一種煙酰胺腺嘌呤二核苷酸生物合成酶。Fukuhara等在內(nèi)臟脂肪發(fā)現(xiàn)了一種與PBEF相類似的脂肪細(xì)胞因子稱為內(nèi)脂素(Visfatin)。Visfatin是一個(gè)52-kDa的二聚體蛋白，每個(gè)單體含有491氨基酸，每個(gè)單體

3、由19β-折疊和13個(gè)α-螺旋及兩個(gè)結(jié)構(gòu)域構(gòu)成。二聚體蛋白中心接有兩個(gè)活性位點(diǎn)。最近的研究報(bào)告結(jié)果顯示，Visfatin可以在骨髓，肝臟和肌肉，腦，腎，脾，睪丸，肺等組織表達(dá)，但在內(nèi)臟脂肪組織中高度表達(dá)。這已在一些肥胖動(dòng)物模型中證實(shí)，內(nèi)臟脂肪組織中Visfatin表達(dá)量較其他組織更多。最近Brown等報(bào)道，Visfatin具有類胰島素作用，能夠調(diào)節(jié)胰島素分泌，降低血糖，促進(jìn)脂肪組織的分化與合成。不僅如此，Visfatin還可以調(diào)節(jié)血管平

4、滑肌的成熟和胰島素的分泌，并參與炎癥反應(yīng)和免疫功能的調(diào)節(jié)。此外還有文獻(xiàn)報(bào)道Visfatin還參與脂質(zhì)代謝，并可能在穩(wěn)定斑塊過程中起重要作用。
　　腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)在多種疾病狀態(tài)的病理生理中起著顯著作用。RAAS的異常激活，可導(dǎo)致血管平滑肌痙攣、心肌肥厚和纖維化，引起一系列心臟、血管和腎臟并發(fā)癥。大量關(guān)于RAAS的臨床研究已被證明，阻斷RAAS對(duì)高血壓、急性心肌梗死、慢性心臟衰竭、中風(fēng)和糖尿病腎病患者有益。由

5、此推論腎素-血管緊張素-醛固酮(RAAS)系統(tǒng)包括其激活產(chǎn)生的細(xì)胞因子及信號(hào)傳導(dǎo)在冠心病、糖尿病、高血壓及炎癥反應(yīng)等眾多疾病的病理生理和發(fā)病機(jī)制過程中起重要作用。血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)是RAAS中最重要的生物活性物質(zhì)。AngⅡ受體有AT1～4，其中AngⅡ大部分的生理作用是通過AT1受體介導(dǎo)的。S.D.Crowley等通過將AT1受體缺陷小鼠腎臟移植至正常小鼠的方法，發(fā)現(xiàn)血管緊張素Ⅱ在許多組織中通過AT1受體調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)重吸收，以防

6、止血容量不足引起的循環(huán)衰竭。同時(shí)證實(shí)了AT1受體在水、電解質(zhì)重吸收，心力衰竭，高血壓病的病理生理發(fā)展過程有著重要作用。S.B.Gurley等更進(jìn)一步通過敲除腎小管上皮細(xì)胞AT1受體的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，AT1受體通過調(diào)節(jié)NHE3鈉-質(zhì)子交換泵來調(diào)節(jié)水及電解質(zhì)的重吸收。Schmidt-Ott KM等還發(fā)現(xiàn)AngⅡ作用AT1受體可以觸發(fā)血管平滑肌細(xì)胞反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞增殖、遷移并促進(jìn)生長(zhǎng)因子和細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生。也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)AngⅡ可以通過AT1受體介導(dǎo)心

7、肌成纖維細(xì)胞膠原合成和分泌，促進(jìn)心肌細(xì)胞纖維化。而AT2僅在胎兒時(shí)期高度表達(dá)，出生后表達(dá)下降，除了腎上腺髓質(zhì)、子宮、卵巢、血管內(nèi)皮及大腦的特定區(qū)域還存在高密度表達(dá)，在健康成人心肌細(xì)胞上其表達(dá)遠(yuǎn)少于AT1。Lucius R及Nio Y等發(fā)現(xiàn)AT2受體某些特殊情況下如心力衰竭、心肌梗死恢復(fù)以及皮膚與神經(jīng)系統(tǒng)受損修復(fù)等情況下表達(dá)會(huì)上調(diào)，這預(yù)示著AT2受體可能具有介導(dǎo)調(diào)節(jié)增殖、促進(jìn)細(xì)胞分化，促進(jìn)胚胎發(fā)育和血管形成及促進(jìn)傷口愈合、組織修復(fù)的作用。

8、Munzenmaier DH等還通過給予灌服AT1受體拮抗劑大鼠AngⅡ干預(yù)的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，給予AngⅡ干預(yù)后，大鼠血壓未引起急劇升高，同時(shí)降壓作用明顯增強(qiáng)。繼續(xù)給予AT2阻斷劑后，發(fā)現(xiàn)降壓作用卻明顯降低。由此推論AT2受體可能介導(dǎo)血管舒張反應(yīng)，協(xié)助AT1受體拮抗劑起降壓作用。AT3和AT4作用尚未明確，以上實(shí)驗(yàn)及研究表明，AngⅡ受體在許多心血管疾病的病理生理發(fā)展過程中其重要作用。
　　以往的研究發(fā)現(xiàn)Visfatin可能在心血管疾病

9、中起重要作用，已有實(shí)驗(yàn)證實(shí)AngⅡ可以促進(jìn)心肌細(xì)胞表達(dá)Visfatin，并在AngⅡ10-6mmol/l，作用24小時(shí)條件下，心肌細(xì)胞表達(dá)Visfatin水平最高。但到目前為止，還沒有任何研究探討血管緊張素Ⅱ促進(jìn)心肌細(xì)胞Visfatin表達(dá)上調(diào)的受體機(jī)制。本研究通過給予不同AngⅡ受體阻斷劑干預(yù)，以進(jìn)一步了解心肌細(xì)胞Visfatin表達(dá)與AngⅡ受體關(guān)系。為了解心血管疾病的發(fā)病機(jī)制增加了新內(nèi)容、新思路，為臨床防治提供一個(gè)新的靶點(diǎn)。

10、>　　方法：在無菌試驗(yàn)條件下不分性別的取新生2-3天的Sprague-Dawley(SD)乳鼠心肌細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)，在48小時(shí)含血清培養(yǎng)，24小時(shí)撤血清培養(yǎng)之后，選取形態(tài)及生長(zhǎng)狀態(tài)良好的心肌細(xì)胞隨機(jī)分為4組：(1)空白對(duì)照組、(2)AngⅡ干預(yù)組、(3)AngⅡ+AT1R(替米沙坦)組、(4)AngⅡ+AT2R(PD123319)組，后三組均給予AngⅡ10-6mol/L干預(yù)24h。通過RT-PCR和ELISA技術(shù)檢測(cè)心肌細(xì)胞Visfa

11、tin的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.體外成功培養(yǎng)新生SD大鼠心肌細(xì)胞。
　　2.給予AngⅡ干預(yù)后Visfatin-mRNA及蛋白表達(dá)均高于無AngⅡ作用的組。
　　3.AngⅡ+AT1R(替米沙坦)組和AngⅡ+AT2R(PD123319)組Visfatin-mRNA及蛋白表達(dá)有明顯差異，AngⅡ+AT2R(PD123319)組Visfatin-mRNA及蛋白表達(dá)明顯高于AngⅡ+AT1 R(替米沙坦)組。