柑橘同步化懸浮系建立及微原生質體分離.pdf

1、微融合(Microprotoplastfusion)是進行植物部分基因組轉移的非對稱融合新途徑。獲得高頻率的微核是開展微融合的關鍵，而同步化的懸浮系有利于微核的分離。鑒于此，本研究旨在建立同步化的細胞系，嘗試分離微核并建立分離體系，為今后開展微融合奠定基礎。主要研究結果如下： 1.研究了國慶1號(Citrusunshiu‘GuoqingNo.1’)、默科特橘橙(C.reticulata×C.sinensis)、錦橙(C.sine

2、nsis)三個品種的細胞周期，結果表明三種懸浮系在培養(yǎng)的8d時間里，第3-4d時懸浮系的G2/M期細胞比例達到最高值，分別為25.46％、25.82％、25.56％。 2.以默科特橘橙懸浮系為材料，測定懸浮系培養(yǎng)8d的生長周期。結果表明，第3-4d時細胞生長最快，呈對數(shù)增長，與細胞周期相吻合。說明生長較快的愈傷組織建立的懸浮細胞系在第3-4d細胞分裂最快，處于指數(shù)生長期。 3.以國慶1號為材料進行細胞同步化處理的研究。分

3、別用羥基脲(HU)、甲基氨草磷(APM)、及HU和APM雙阻斷三種方法處理國慶1號胚性懸浮系，研究其對細胞周期和有絲分裂指數(shù)的影響。HU處理對S期的細胞有富集作用，國慶1號用濃度為4mM或10mMHU處理24h時，其S期的細胞周期分別達到36.53％、37.51％；APM能將細胞周期阻斷在G2/M期，國慶1號用32μMAPM處理24h，其G2/M期的細胞周期達到25.73％；以4mM或10mMHU處理24h后再用32μMAPM處理24h

4、和4h時，胚性懸浮系的G2/M期細胞比例和有絲分裂指數(shù)較高達到30％以上。上述結果表明，這三種方法都能起到同步化的作用。 4.測定了默科特橘橙、山金柑、來檬三個品種同步化處理后的細胞周期，發(fā)現(xiàn)三種懸浮系的G2/M期細胞比例都達到30％以上，來檬的G2/M期細胞比例最高，達到51.90％。說明不同品種同步化處理后其G2/M期細胞的比例相差較大。 5.測定國慶1號和默科特橘橙同步化處理后的原生質體活力達到90％，與對照沒有差

5、異。以國慶1號同步化處理材料，進行微核化細胞學觀察。結果表明，4mM或10mMHU處理24h后再用32μMAPM處理4h和24h時，胚性懸浮系的細胞微核化比例均比對照高；在處理時間為24h時達到最高，分別為55.56％、61.54％。 6.觀察國慶1號微核化原生質體的微核數(shù)，統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)以4mM或10mMHU處理24h后再用32μMAPM處理4h和24h時分離的微核化原生質體含有的微核較多，APM處理24h時每個原生質體含有的平均微