苦參粗提物對(duì)柯薩奇B組3型病毒急性及持續(xù)性感染抑制作用的研究.pdf

1、目的：柯薩奇病毒是人類重要的病原體，可引起心肌炎、心包炎等疾病，嚴(yán)重危害人類健康?？箍滤_奇病毒治療可有效改善病毒性心肌炎臨床癥狀，延緩病程，中藥黃芪抗柯薩奇病毒療效明確，本試驗(yàn)以黃芪作為陽(yáng)性對(duì)照藥物，探討苦參粗提物對(duì)柯薩奇病毒急性及持續(xù)性感染的抑制效果及可能的作用機(jī)制。 方法和結(jié)果： 1．建立CVB3持續(xù)感染細(xì)胞模型：以10<'-4>TCID50 CVB3感染ECV304細(xì)胞，建立CVB3持續(xù)感染細(xì)胞模型，觀察持續(xù)感染細(xì)

2、胞模型培養(yǎng)上清液對(duì)Vero細(xì)胞的CPE和RT-PCR法檢測(cè)上清中的CVB3核酸。 結(jié)果：持續(xù)感染模型細(xì)胞培養(yǎng)上清液可使Vero細(xì)胞產(chǎn)生明顯CPE，并含有少量病毒核酸，表明CVB3持續(xù)感染細(xì)胞模型建立成功。 2．以100TCID50 CVB3病毒液為感染濃度，苦參藥液濃度為4mg/ml、2mg/ml和1mg/ml，按苦參對(duì)CVB3的作用方式分為三組：預(yù)防組、直接作用組和感染后給藥組，進(jìn)行苦參對(duì)CVB3急性感染抑制作用的研究

3、，MTT法檢測(cè)苦參對(duì)CVB3的抑制作用；用原位ELISA、細(xì)胞保護(hù)試驗(yàn)、RT-PCR和TNF-α檢測(cè)，判斷苦參對(duì)CVB3持續(xù)感染的抑制作用。 結(jié)果：在藥物對(duì)病毒的預(yù)防作用組中，苦參不能預(yù)防CVB3感染，CVB3對(duì)ECV304細(xì)胞CPE未明顯減輕；在藥物和病毒直接作用組及感染病毒后給藥組中，ECV304細(xì)胞病變明顯減輕，呈劑量依賴性，隨苦參濃度的增高，藥物對(duì)CVB3的抑制率增高：在苦參對(duì)CVB3持續(xù)感染作用組中，與模型對(duì)照組相比，

4、苦參作用后培養(yǎng)上清液致Vero細(xì)胞病變明顯減輕， CVB3核酸復(fù)制減少、TNF-α含量降低，原位ELISA顯示細(xì)胞表面CVB3抗原表達(dá)減少。與陽(yáng)性藥物黃芪比較，兩種藥物作用效果相似，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1．本研究重復(fù)本室已建方法再建CVB3持續(xù)感染細(xì)胞模型成功，為體外抗病毒研究提供可靠的工具； 2．以黃芪為陽(yáng)性對(duì)照藥物，探討苦參對(duì)CVB3感染的抑制作用，發(fā)現(xiàn)①苦參能有效抑制CVB3對(duì)ECV304細(xì)胞的急性