阿爾茨海默氏病轉基因小鼠的構建及相關研究.pdf

1、【目的】阿爾茨海默氏病(Alzheimer's Disease,AD)是一種隨著世界人口年齡的增長而遞增的神經退行性紊亂。導入早老素1(presenilin 1,PS1)的動物模型能表現(xiàn)出與人類AD患者相似的病理特征。為進一步闡明AD的發(fā)病機理及為治療AD提供動物模型,本研究擬構建國內首例人類PS1突變型(PS1AE9)轉基因小鼠,并對其進行一系列鑒定。為了進一步探索AD治療的新方法,我們將TNF相關凋亡誘導配體(TNF-related

2、 apoptosis inducing ligand,TRAIL)基因注入正常昆明白小鼠第四腦室,檢測一系列基因表達水平的變化并初步觀察其安全性。 【方法】用顯微注射的方法將PrP-PSlAE9片斷注入C57(♀)和DBA(♂)雜合受精卵的雄原核中。采用PCR、Southem Blot、RT-PCR、Real-Time PCR、Western Blot、免疫組化、H/E染色和行為學方法檢測轉基因陽性小鼠。另外從人類基因組中克隆

3、trail基因,構建質粒pAAV-TRAIL,注射到昆明白小鼠第四腦室,采用RT-PCR和H/E染色檢測一系列基因的表達水平和大腦病理情況。 【結果】顯微注射后受精卵的完整率、幼仔的出生率和外源基因的整合率分別為79.59[％]、7.44[％]和1.03[％];通過PCR和Southem雜交成功檢測出4只PrP-PS1AE9轉基因陽性小鼠;RT-PCR和Real-TimePCR結果顯示在轉基因陽性鼠的大腦中表達人psl基因;W

4、estern雜交結果顯示轉基因陽性鼠的大腦中。PSl蛋白的表達量高于野生型小鼠;免疫組化結果顯示在轉基因陽性鼠的大腦皮質區(qū)和海馬區(qū)的神經細胞胞漿中高表達PS1蛋白,而在野生型小鼠的大腦的皮質區(qū)僅見神經細胞胞漿有較弱PSI染色;H/E染色結果顯示轉基因陽性鼠的大腦結構非正常,神經纖維溶解,膠質細胞和淋巴細胞增生,神經細胞變性腫脹或壞死,并出現(xiàn)噬神經現(xiàn)象,而野生型小鼠的大腦海馬和皮質區(qū)的結構基本正常;行為學分析結果顯示轉基因鼠及其F1代學習

5、和記憶能力均低于野生型。hTRAIL注射后未見小鼠腦組織出現(xiàn)病理變化,RT-PCR結果顯示BDNF、NT4、CD11b、CD11c、Nestin、SOX1、CNTF及GDNF的mRNA表達升高。 【結論】本實驗采用顯微注射的方法成功構建了PrP-PS1 E9轉基因陽性小鼠,轉基因小鼠腦中表達人類psl基因及其所編碼的蛋白,具有與人類阿爾茨海默氏病相似的病理及行為學改變。hTRAIL注射后未見引起腦內病理改變，同時可能誘導小鼠腦組