中藥骨碎補對成骨細胞的作用機制研究.pdf

1、目的：骨碎補是臨床上常用的一味強骨中藥，最近的研究發(fā)現(xiàn)它可以促進成骨細胞的增殖和分化。本實驗旨在觀察雌激素受體及MAPK、PI-3K信號通路在骨碎補促進成骨細胞增殖和分化過程中的影響。同時首次探討骨碎補對成骨細胞OPG/RANKL系統(tǒng)表達的影響。 方法：采用活細胞計數(shù)法和3H-DR摻入法觀察骨碎補對小鼠成骨細胞系MC3T3一E1增殖的影響.堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)活性、骨鈣素(osteoca

2、lcin，OC)和I型膠原的表達均采用ELISA法檢測。使用茜素紅染色法觀察骨碎補對細胞礦化的影響，氯化十六烷基嘧啶提取染色茜素紅，540 nm分光光度測定法測定提取液，量化礦化結(jié)節(jié)染色結(jié)果。用Western-blot檢測護骨素(OPG)的蛋白表達量，用ELISA法檢測NF-kB受體活化因子配體(RANKL)蛋白的分泌。 結(jié)果：(1)骨碎補可以促進MC3T3-E1細胞DNA的合成。(2)骨碎補可以增加細胞內(nèi)ALP活性，促進I型膠

3、原的合成和分泌，但對骨鈣素的表達和分泌量無影響。(3)骨碎補可以促進成骨細胞的礦化。(4)雌激素受體拮抗劑ICI182780及ERK、PI-3K信號通路的阻斷劑能抑制骨碎補促進MC3T3-E1細胞增殖的作用。(5)雌激素受體拮抗劑ICll82780及ERK、P38信號通路的阻滯劑能抑制骨碎補促進MC3T3-E1細胞ALP表達的作用。(6)通過Western-blot檢測發(fā)現(xiàn)骨碎補可以促進OPG的表達。(7)ELISA方法證明骨碎補對RA