低氧-HIF-1a通路對成骨細胞與破骨細胞間耦聯(lián)的調(diào)控作用.pdf

1、破骨細胞是骨重建的重要細胞，骨重建可骨骼每十年得到一次全面的更新。破骨細胞來源于骨髓單核巨噬細胞系，在體內(nèi)主要受骨髓基質(zhì)細胞或成骨細胞分泌的（receptor activator of nuclear factor-kB ligand，RANKL）和巨噬細胞集落刺激因子（macrophagecolony stimulating factor M-CSF）兩種分子調(diào)控。本試驗通過間接接觸的方式建立成骨細胞和破骨細胞共培養(yǎng)模型探討成骨細胞對

2、破骨細胞的影響。
　　 目的：建立HIF-1和VHL基因成骨細胞與破骨細胞共培養(yǎng)模型，為探討低氧/HIF-1通路對成骨細胞與破骨細胞間耦聯(lián)的調(diào)控作用奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：取3-4天的不同基因型小鼠顱蓋骨胞和4-8周齡小鼠四肢長骨，分別分離培養(yǎng)成骨細胞和破骨細胞，采用間接接觸的方式將接種了破骨細胞的共培養(yǎng)皿或骨片置于提前24小時接種了成骨細胞的六孔板中共培養(yǎng)，real-time的方法檢測成骨細胞rankl和opgRT-P

3、CR的方法檢測破骨細胞的標志基因TRAP的表達情況，以及破骨細胞骨形成的骨陷窩。
　　 結(jié)果：rankl的量，vhl各組隨著共培養(yǎng)時間的延長表達量依次減少。Opg的量，骨吸收陷窩9天開始出現(xiàn)，隨著共培養(yǎng)時間的延長，陷窩數(shù)量和面積逐漸增多，HIF-1-/-陷窩數(shù)量和面積明顯較其他實驗組多，而HIF-1-/-vhl-/-陷窩數(shù)量和面積最少。破骨細胞的標志基因TRAP在5天組開始表達。
　　 結(jié)論：低氧/HIF-1通路激活后，