橙皮苷的抗炎免疫作用及部分機制研究.pdf

1、目的：本實驗采用多種急、慢性炎癥和免疫炎癥性模型，并通過一系列體內(nèi)、體外免疫藥理實驗，研究橙皮苷(hesperidin，HDN)抗炎免疫作用并探討其部分作用機制。結(jié)果如下： 方法和結(jié)果：1.HDN的抗炎作用：采用二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳腫脹、角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠足爪腫脹、棉球誘導(dǎo)的大鼠肉芽腫和佛氏完全佐劑(Freund'scompleteadjuvant，F(xiàn)CA)誘導(dǎo)的佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvantarthritis，AA)模型，觀察H

2、DN對實驗動物炎癥反應(yīng)的抑制作用。結(jié)果可見，HDN(120，240mg·kg-1，ig)對二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳腫脹有明顯的抑制作用；HDN(40，80，160mg·kg-1，ig)對角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠足腫脹、棉球誘導(dǎo)的大鼠肉芽腫和AA大鼠的原發(fā)性炎癥反應(yīng)有明顯的抑制作用。提示HDN具有明顯的抗炎作用。 2.HDN的免疫調(diào)節(jié)作用采用腹腔注射環(huán)磷酰胺復(fù)制免疫功能低下的動物模型；測定胸腺、脾臟重量計算臟器指數(shù)；碳廓清法測定單核巨噬細胞吞

3、噬功能；分光光度法測定血清溶血素HCIgM、HCIgG；QHS法測定分泌細胞溶血空斑值(PFC)；MTT法測定脾淋巴細胞增殖反應(yīng)；以二硝基氟苯(dinitrofluorobenzene，DNFB)誘導(dǎo)遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(delayed-typehypersensitivity,DTH)模型，觀察HDN對小鼠DTH和T淋巴細胞亞群的影響。 結(jié)果可見，HDN(120，240mg·kg-1，ig)可顯著提高免疫低下小鼠的臟器指數(shù)、碳廓清指

4、數(shù)K和吞噬指數(shù)α，提高免疫低下小鼠的巨噬細胞吞噬功能，HDN(60，120，240mg·kg-1，ig)可以上調(diào)免疫抑制小鼠低下的脾淋巴細胞增殖反應(yīng);HDN(120，240mg·kg-1，ig)恢復(fù)免疫抑制小鼠DTH，各個劑量組的HDN均可以提高CD4+、CD8+細胞數(shù)，尤其是CD4+細胞數(shù)，提高免疫低下小鼠細胞免疫功能。提示HDN能夠通過增強小鼠的非特異性免疫和細胞免疫而增強免疫功能低下小鼠的免疫功能。 體外研究進一步發(fā)現(xiàn)，H

5、DN(10-4，10-5，10-6mol·L-1)可糾正AA大鼠低下的脾淋巴細胞增殖反應(yīng)，HDN(10-4，10-5，10-6mol·L-1)降低AA大鼠PMφ產(chǎn)生過高的IL-1和TNF-α，提示HDN可調(diào)節(jié)AA大鼠異常的細胞免疫功能。HDN在10-4～10-7mol·L-1濃度范圍內(nèi)能夠濃度依賴性地抑制AA大鼠PMφ中PGE2和LTB4的產(chǎn)生，提示HDN的抗炎免疫調(diào)節(jié)作用與抑制PGE2和LTB4的生成有關(guān)，即與影響花生四烯酸的代謝有關(guān)

6、。 3.HDN對AA大鼠繼發(fā)性炎癥的治療作用及部分機制研究用佛氏完全佐劑(CFA)誘導(dǎo)AA大鼠模型，用繼發(fā)性足腫脹、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎評分、踝關(guān)節(jié)病理組織學(xué)改變等指標(biāo)來評價HDN對AA大鼠的治療作用，MTT法檢測脾淋巴細胞增殖反應(yīng)，用放射免疫法分別測定AA大鼠脾淋巴細胞培養(yǎng)上清液中IL-2水平和AA大鼠腹腔巨噬細胞培養(yǎng)上清液中IL-1、IL-6和TNF-α的水平，AA大鼠血清中NO、MDA和SOD的水平按相應(yīng)的試劑盒說明書測定。

7、 研究發(fā)現(xiàn)，治療劑量的HDN對AA大鼠繼發(fā)性炎癥(繼發(fā)性足腫脹、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎評分、繼發(fā)性炎癥的踝關(guān)節(jié)病理組織學(xué)改變)有明顯的抑制作用。治療劑量的HDN可明顯提高AA大鼠低下的脾淋巴細胞增殖反應(yīng)和脾淋巴細胞IL-2產(chǎn)生，抑制AA大鼠PMφ產(chǎn)生過高的IL-1、IL-6和TNF-α，降低AA大鼠血清中NO和氧自由基MDA水平，且能提高AA大鼠血清中過低的SOD水平。提示HDN對AA大鼠有明顯的治療作用，其作用機制與調(diào)節(jié)機體免疫功能，減少炎癥