商陸皂苷甲抗炎免疫調(diào)節(jié)作用分子機(jī)制的研究.pdf

1、商陸總皂苷是從中國商陸的塊根中提取的三帖皂苷,(囊癖靈)治療子宮內(nèi)膜異位癥已獲專利,治療卵巢囊腫和乳腺增生已獲準(zhǔn)進(jìn)入Ⅲ期臨床。商陸皂苷甲(Esculentoside A,EsA)是商陸中含量最高的皂苷。以前的很多研究表明,EsA對(duì)多種實(shí)驗(yàn)性急慢性炎癥和自身免疫性疾病具有顯著的作用,對(duì)體液免疫和過度激活的巨噬細(xì)胞有顯著的抑制作用,能使巨噬細(xì)胞吞噬能力下降,能抑制淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞釋放多種細(xì)胞因子和介質(zhì),如白介素-1(Interleukin

2、-1,IL-1)、白介素-2(Interleukin-2,IL-2)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、腫瘤壞死因子(Tumor necrosis factor,TNF)、前列腺素E2(Prostaglandin E2,PGE2)等,但是,對(duì)其抗炎免疫調(diào)節(jié)作用機(jī)制的認(rèn)識(shí),遠(yuǎn)遠(yuǎn)未能令人滿意。小鼠基因芯片檢測了EsA作用下靜息和ConA活化的小鼠胸腺細(xì)胞早期敏感反應(yīng)基因表達(dá)譜的變化,芯片結(jié)果顯示EsA可調(diào)節(jié)胸腺細(xì)胞一氧化氮

3、(nitric oxide,NO)、基質(zhì)金屬蛋白酶、活化STAT抑制蛋白(protein inhibitor of activated STAT protein 1,PIAS1)等相關(guān)的基因靶群。這些基因靶群的發(fā)現(xiàn)為我們尋找EsA的分子機(jī)制提供了重要的線索。 基于EsA作用的主要靶細(xì)胞是激活狀態(tài)下的巨噬細(xì)胞以及前期基因芯片初篩發(fā)現(xiàn)的可能與EsA抗炎免疫相關(guān)的基因靶群,本課題選擇小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7細(xì)胞為靶細(xì)胞,進(jìn)一步研

4、究EsA對(duì)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO、金屬蛋白酶和活化STAT抑制蛋白表達(dá)的影響。 主要研究結(jié)果如下： (1)采用Griess法測定NO活性,EsA(2.5-10 mg/L)能顯著抑制脂多糖(LPS)激活小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7細(xì)胞釋放NO;采用Western Blot方法發(fā)現(xiàn),EsA能顯著抑制LPS誘導(dǎo)增加的一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表達(dá)。 (2)采用實(shí)時(shí)定量PCR檢測,EsA(2.5-10mg/L)能顯著抑制L

5、PS誘導(dǎo)增加的基質(zhì)金屬蛋白酶-9表達(dá),但對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子TIMP-2表達(dá)無影響；EsA5和10 mg/L能顯著增加TGF-β1表達(dá)； (3)EsA顯著抑制LPS激活的小鼠巨噬細(xì)胞FK506結(jié)合蛋白FKB1A和環(huán)親和素PPIA以及活化STAT抑制蛋白PIAS1的mRNA水平。 以上結(jié)果表明,ESA可能通過抑制炎癥介質(zhì)NO和MMP-9的產(chǎn)生,促進(jìn)免疫抑制因子TGF-β1的產(chǎn)生,來發(fā)揮抗炎免疫調(diào)節(jié)作用。此外,調(diào)控與炎癥