染鉛早期大鼠海馬NOS活性及nNOS蛋白與基因表達(dá)的變化.pdf

1、NOS是催化產(chǎn)生內(nèi)源性NO的唯一酶類(lèi),而NOS是鉛毒作用的靶分子之一,不同濃度醋酸鉛溶液對(duì)大鼠海馬nNOS陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)目有一定的影響,但鉛對(duì)NO及NOS的早期影響是否與鉛致學(xué)習(xí)記憶及LTP的損害有關(guān),目前尚未見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道,故本研究對(duì)鉛暴露早期大鼠海馬NOS活性及nNOS蛋白與基因表達(dá)的變化進(jìn)行了探討,旨在為揭示鉛對(duì)學(xué)習(xí)記憶影響的機(jī)理提供一定的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù).方法:選用剛斷乳健康Wistar大鼠50只(10-14d齡,雌雄各半),自由飲

2、水進(jìn)食適應(yīng)性喂養(yǎng)3天.實(shí)驗(yàn)時(shí),隨機(jī)分為對(duì)照組和染鉛3h,6h,12h和24h組共五組,除24h組為6只外,其余各組均為11只,一次性腹腔注射受試動(dòng)物進(jìn)行染毒:(1)對(duì)照組:等體積0.9％NaCl;(2)染鉛組:體重劑量為130mg/kg的醋酸鉛溶液.每組6只動(dòng)物經(jīng)0.4％戊巴比妥鈉腹腔麻醉后,繼以4℃ 4％多聚甲醛500ml灌注固定,取腦置4℃的4％多聚甲醛固定液中后固定6h,梯度脫水后恒冷箱冰凍切片機(jī)內(nèi)冰凍切片(片厚約50μm),切片

3、分成兩份分別進(jìn)行NADPH-d組化染色和ABC免疫組化染色以觀測(cè)海馬NOS活性和nNOS表達(dá)的變化.另外各組5只動(dòng)物斷頭后分離海馬組織,提取海馬總RNA,進(jìn)行RT-PCR實(shí)驗(yàn)觀測(cè)海馬nNOS基因表達(dá)的變化.每組選對(duì)應(yīng)斷面的海馬腦片15張,分別計(jì)數(shù)CA1、CA3和齒狀回片內(nèi)所有NOS和nNOS陽(yáng)性神經(jīng)元,并對(duì)各區(qū)的神經(jīng)元的分布、形態(tài)、染色強(qiáng)度在光鏡下觀察;以?xún)?nèi)參GAPDH光密度值標(biāo)化nNOS的光密度值,得到nNOS RT-PCR產(chǎn)物的相對(duì)