穹窿海馬傘切割大鼠海馬內(nèi)Brn-4 mRNA的表達(dá)變化.pdf

1、目的：觀察切割穹窿海馬傘大鼠海馬與正常海馬內(nèi)Bm-4mRNA表達(dá)的差異，探討穹窿海馬傘切割后海馬內(nèi)神經(jīng)再生與修復(fù)的分子生物學(xué)機(jī)制。 方法：(1)RT-PCR：42只SD大鼠隨機(jī)分成7組，每組6只。l組為正常對(duì)照組，其余6組分別為切割雙側(cè)穹窿海馬傘后1、3、7、14、21和28d組。取各組大鼠的海馬組織，提取總RNA，采用半定量RT-PCR法分析穹窿海馬傘切割后海馬內(nèi)Bm-4mRNA表達(dá)水平的變化。以各泳道中Bm-4與GAPDH條

2、帶的光密度比值表示Bm-4mRNA的相對(duì)表達(dá)量，使用Stata7．0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行單因素方差分析和兩兩比較。(2)原位雜交：取6只SD大鼠，切割右側(cè)穹窿海馬傘。切割后14d，灌注固定，制備海馬部位冰凍切片；采用體外轉(zhuǎn)錄法制備地高辛標(biāo)記的Bm-4RNA探針，進(jìn)行原位雜交，觀察兩側(cè)海馬組織內(nèi)Bm-4mRNA的表達(dá)變化。每只動(dòng)物取前、中、后3張切片，分別對(duì)每張切片切割側(cè)和正常側(cè)Bm-4mRNA陽性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和光密度值檢測(cè)，并應(yīng)用Stata7

3、．0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)兩側(cè)Bm-4mRNA陽性細(xì)胞的數(shù)量和平均光密度值進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)分析。 結(jié)果：(1)海馬內(nèi)Bm-4mRNA的表達(dá)量在正常組為O．138±0．06，在切割后第3d(0．256±0．54)開始升高，14d(0．719±O．124)達(dá)到最高水平，隨后下降，28d(O．189±0．059)左右恢復(fù)至正常水平。(2)切割側(cè)和正常側(cè)海馬錐體細(xì)胞層和齒狀回顆粒層細(xì)胞均有Bm-4mRNA表達(dá)，Bm-4mRNA陽性細(xì)胞數(shù)量無明顯差異

4、，但切割側(cè)Bm-4mRNA陽性細(xì)胞的平均光密度值(0．27±0．06)較正常側(cè)(O．14±0．02)明顯增加，t值為¨．4709，P<0．01。在切割側(cè)齒狀回門區(qū)和顆粒下層中觀察到Bm-4mRNA陽性細(xì)胞(40．5±9．37)，平均光密度值為0．28±0．05，而正常側(cè)僅有少量陽性細(xì)胞(6．5±2．07)，且平均光密度值僅為0．09±0．02，兩側(cè)陽性細(xì)胞數(shù)和平均光密度值相比較，P均