農桿菌介導的Chi和Glu基因轉化黃瓜的研究.pdf

1、黃瓜(Cucumis sativus L.)是葫蘆科黃瓜屬的蔬菜作物,在國內乃至世界范圍內栽培面積較大.真菌病害的發(fā)生給黃瓜生產帶來巨大的損失,制約了黃瓜的產量和品質的提高.植物基因工程的快速發(fā)展為抗性育種提供了一種嶄新而有效的方法.來源于菜豆的幾丁質酶基因(chitinase gene, Chi),其蛋白質產物能夠降解含幾丁質的真菌細胞壁,抑制真菌生長.克隆自煙草的β-1,3-葡聚糖酶基因(β-1,3-glucanase gene,

2、Glu)產物β-1,3-葡聚糖酶能夠降解許多真菌菌絲暴露在表面的β-1,3-葡聚糖,從而抑制真菌的生長.該實驗建立了穩(wěn)定的黃瓜再生、轉化體系,并將Chi基因和Glu基因導入3個基因型的黃瓜基因組中.主要結果如下:1.對于黃瓜離體再生芽的誘導,黃瓜萌發(fā)狀態(tài)的幼嫩子葉在MS附加2.0mg/L BA和1.0mg/L ABA的激素組合中再生最好.2.新型激素TDZ對黃瓜離體外植體的不定芽誘導作用不明顯,表現(xiàn)出較強的生長素活性,黃瓜子葉和下胚軸在

3、MS附加有低濃度TDZ的培養(yǎng)基中迅速生根.3.適量濃度的AgNO<,3>可以促進黃瓜離體子葉的再生,通常2.0mg/L AgNO<,3>能發(fā)揮最好的效果,過量則抑制芽的再生.4.在MS附加激素2.0mg/L BA和1.0mg/L ABA,并添加有2.0mg/L AgNO<,3>時,津研四號和津研七號幼嫩子葉的不定芽誘導率分別為92.97﹪,82.43﹪,另一基因型綠霸春的幼嫩子葉芽的再生率為94.73﹪.5.非轉化因子Km抗性測驗表明:

4、100mg/L的卡那霉素完全抑制津研四號和津研七號的子葉再生,在此濃度下綠霸春產生極少的白化芽和畸形芽.6.頭孢霉素濃度在100~400mg/L范圍內對黃瓜子葉外植體不定芽誘導的抑制作用不明顯.7.煙草細胞懸浮系看護培養(yǎng)對黃瓜的遺傳轉化影響不明顯.8.對部分抗性植株提取DNA,經Multiplex PCR、Southern雜交檢測證明,外源基因已整合入黃瓜基因組中.獲得津研四號和津研七號轉基因再生植株.9.轉基因植株田間接種試驗表明,部