旱柳基因轉(zhuǎn)化再生體系的建立和農(nóng)桿菌介導(dǎo)的BADH基因轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、本試驗(yàn)所用旱柳品系Q106是山東省東營市的地方優(yōu)良新品種,與其它旱柳品種相比,具有一定的抗旱、耐鹽、耐瘠薄、抗風(fēng)沙能力,并且有速生、成材早等優(yōu)點(diǎn).在生態(tài)環(huán)境中起著很重要作用,同時(shí)也是良好的園林綠化材料.土壤鹽漬化是影響農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和生態(tài)壞境的一個(gè)重要因素.它使大量的國土荒蕪,生態(tài)環(huán)境更加惡劣.因此,鹽堿地資源開發(fā)利用有著及其重要的社會意義.旱柳的最高耐鹽性為4‰,超過此極值,其生長受到限制、甚至死亡.對此本實(shí)驗(yàn)在利用旱柳組培再生體系建立的基

2、礎(chǔ)上,進(jìn)行了農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefacien)介導(dǎo)的甜菜堿醛脫氫酶基因(BADH)導(dǎo)入旱柳的研究,目的是進(jìn)一步提高旱柳的耐鹽性和抗旱性,擴(kuò)大其適宜的種植范圍.主要研究結(jié)果如下:1.旱柳再生體系的建立:以帶芽莖段進(jìn)行無菌材料擴(kuò)繁時(shí)MS+BA0.4 mg/L+NAA0.2 mg/L+蔗糖30 g/L和BA0.4 mg/L+NAA0.4 mg/L+蔗糖30 g/L;MS+BA0.4 mg/L+NAA0.2 mg/L+蔗

3、糖30 g/L和BA0.4 mg/L+IBA0.2 mg/L+蔗糖30 g/L交替使用為最佳;以莖段作為外植體在附加NAA0.25mg/L+BA1.0mg/L的MS培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織效果最好,芽分化率可達(dá)88.3﹪;將出芽愈傷組織塊接種到附加NAA0.15mg/L+KT3.0mg/L的MS分化培養(yǎng)基上效果最佳,平均分化芽數(shù)為15.4個(gè);壯芽培養(yǎng)基為MS+BA0.2 mg/L+NAA0.1 mg/L;生根培養(yǎng)基為1/2MS附加GA30.

4、2 mg/L+NAA0.5 mg/L,生根效果好.2.BADH基因轉(zhuǎn)化體系的建立.400 mg/L的頭孢酶素作為抗菌素抑制和去除農(nóng)桿菌最佳,且對愈傷組織和組培苗生長影響不大;在Kan 10 mg/L時(shí)愈傷組織褐化死亡率97﹪,卡那霉素(Kan)15 mg/L時(shí)組培苗白化死亡率為100﹪;利用農(nóng)桿菌介導(dǎo),以愈傷組織作為外植體進(jìn)行侵染,侵染時(shí)加入10 mg/L乙酰丁香酮,用1/2YEB和1/2MS液體培養(yǎng)基活化農(nóng)桿菌;菌液濃度OD值0.3-