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1、目的:從梅花鹿茸中分離提取出膠原,并對(duì)其性質(zhì)和活性進(jìn)行研究,為今后梅花鹿茸的開(kāi)發(fā)研究奠定基礎(chǔ)。 方法:采用醇提法制備鹿茸膠原,BCA<'TM>試劑盒測(cè)定蛋白濃度、RE-HPLC法和SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法檢測(cè)其純度及其分子量范圍,酸水解法測(cè)定其氨基酸組成,原子力掃描電鏡觀測(cè)膠原的成膜性;用分離得到的鹿茸I型膠原包被培養(yǎng)板,MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況;采用切除大鼠卵巢的方法復(fù)制骨質(zhì)疏松模型,檢測(cè)指標(biāo)為骨密度,骨中鈣含量,血清骨鈣
2、素、血清堿性磷酸酶、一氧化氮和一氧化氮合成酶;用BI-2000圖像分析系統(tǒng)觀測(cè)骨組織及骨形態(tài)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用Excel軟件中的t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,所有數(shù)值均以x±s表示。 結(jié)果:鹿茸醇提物中主要含有I型膠原。含量約為70%,相對(duì)鮮鹿茸,膠原提取率大約為10%。SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示,鹿茸膠原的分子量分布集中在兩部分,一部分在100 kDa-200 kDa之間,為兩條分子量相近的蛋白帶;另一部分在200 kDa以上。鹿茸膠原
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