扇貝多肽對H-,2-O-,2-所致胸腺細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制.pdf

1、目的:探討在H<,2>O<,2>氧化處理下,扇貝多肽(Polypeptide from Chlamys farreri)對小鼠胸腺細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制.方法:建立H<,2>O<,2>對體外培養(yǎng)的小鼠胸腺細(xì)胞氧化損傷的病理模型.試驗(yàn)設(shè)計(jì)分為6組:對照組,H<,2>O<,2>模型組,H<,2>O<,2>+0.5%PCF組,H<,2>O<,2>+0.25%PCF組,H<,2>O<,2>+0.125%PCF組和H<,2>O<,2>+0

2、.1%Vc組.臺盼藍(lán)拒染法檢測細(xì)胞存活率;MTT法檢測細(xì)胞增殖活性;瓊脂糖凝膠電泳觀察DNA ladder;酶生化法測定胞漿超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量以及細(xì)胞抗超氧陰離子能力(A-ASC)和總抗氧化能力(T-AOC);透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變;流式細(xì)胞儀PI染色測定細(xì)胞凋亡率;Fluo-3-AM熒光染色測定細(xì)胞內(nèi)游離[Ca<'2+>]<,i>;羅丹明123(

3、Rhodamine 123)熒光染色測定線粒體膜電位;免疫細(xì)胞化學(xué)檢測細(xì)胞P53、Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)量;原位雜交檢測細(xì)胞p21WAF1 mRNA、p38mRNA的基因表達(dá)量;結(jié)果在12.5 μ M H<,2>O<,2>處理下,PCF在0.125%~0.5%濃度范圍內(nèi)能顯著提高小鼠胸腺細(xì)胞的活性;抑制H<,2>O<,2>所致胸腺細(xì)胞早、中和晚期凋亡的形態(tài)學(xué)改變,維持細(xì)胞的正常超微結(jié)構(gòu);抑制胸腺細(xì)胞DNA梯狀帶的出現(xiàn);降低胸腺細(xì)胞

4、凋亡率;顯著提高胞漿中SOD、GSH-Px的活性,降低ROS、MDA含量,提高A-ASC及T-AOC含量;降低胸腺細(xì)胞內(nèi)游離[Ca<'2+>]<'i>;穩(wěn)定線粒體膜電位;抑制H<,2>O<,2>處理后小鼠胸腺細(xì)胞P53蛋白和Bax蛋白在胞漿中的表達(dá),增強(qiáng)Bcl-2蛋白的表達(dá);同時(shí)還可抑制H<,2>O<,2>處理后小鼠胸腺細(xì)胞p21<'WAF1> mRNA和p38mRNA的表達(dá).以上統(tǒng)計(jì)結(jié)果均有顯著性差異(P<0.01,P<0.05).結(jié)

5、論扇貝多肽能提高體外培養(yǎng)的小鼠胸腺細(xì)胞的活性,抑制H<,2>O<,2>氧化所誘導(dǎo)的胸腺細(xì)胞凋亡,對H<,2>O<,2>所致氧化損傷的小鼠胸腺細(xì)胞具有保護(hù)作用.其機(jī)制與PCF能清除氧自由基、提高抗氧化酶活性、降低細(xì)胞內(nèi)游離[Ca<'2+>]<,i>、保護(hù)細(xì)胞膜相結(jié)構(gòu)、減少DNA斷裂有關(guān);同時(shí)與PCF能抑制突變型P53蛋白和促凋亡蛋白Bax的表達(dá),增強(qiáng)凋亡抑制蛋白Bcl-2的表達(dá)以及抑制p21<'WAF1> mRNA、p38mRNA的表達(dá),