Akt介導(dǎo)氯沙坦對(duì)H-,2-O-,2-誘導(dǎo)乳鼠心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：探討氯沙坦對(duì)H2O2誘導(dǎo)乳鼠心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其與PI3K/AKT信號(hào)通路活化的關(guān)系。 方法：原代培養(yǎng)SD新生大鼠心肌細(xì)胞，以H2O2建立心肌細(xì)胞損傷模型。實(shí)驗(yàn)分組：（A）正常對(duì)照組；（B）H2O2損傷組：培養(yǎng)基中加入H2O2終濃度為100μmol/L；（C）氯沙坦低劑量組：培養(yǎng)基中先加入終濃度為1μmol/L氯沙坦孵育30min，再加入相同的H2O2損傷；（D）氯沙坦中劑量組：先加入終濃度為3μmol/L氯沙坦孵育

2、30min，再加入相同的H2O2損傷；（E）氯沙坦高劑量組：先加入終濃度為10μmol/L氯沙坦孵育30min，再加入相同的H2O2損傷；（F）LY294002干預(yù)組：先加入終濃度為10μmol/L氯沙坦和50μmol/L的LY294002孵育30min，再加入相同的H2O2損傷。不同藥物處理后，觀察各組的心肌細(xì)胞形態(tài)變化、MTT細(xì)胞存活率、測(cè)定培養(yǎng)上清乳酸脫氫酶（LDH）活性、丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性、細(xì)胞漿

3、內(nèi)caspase3/7活性以及Western Blotting檢測(cè)p-Akt（Ser473）蛋白的表達(dá)。 結(jié)果： 1．細(xì)胞形態(tài)：H2O2損傷組和LY294002干預(yù)組心肌細(xì)胞均停止自發(fā)搏動(dòng)，細(xì)胞間連接減少，細(xì)胞偽足收縮，細(xì)胞胞體變圓、腫脹甚至懸浮。氯沙坦各劑量組均能夠逆轉(zhuǎn)H2O2引起的這些改變。 2．MTT細(xì)胞存活率：與正常組相比，H2O2損傷組和LY294002干預(yù)組的心肌細(xì)胞存活率顯著降低，與損傷組相比，LY

4、294002干預(yù)組細(xì)胞存活率無(wú)差別，氯沙坦各劑量組均能顯著提高細(xì)胞存活率，但各劑量組間并沒(méi)有差別。LY294002干預(yù)組存活率明顯低于氯沙坦高劑量組。 3．LDH活性：與H2O2損傷組相比，氯沙坦各劑量組均能夠顯著降低LDH活性。H2O2損傷組和LY294002干預(yù)組這兩組間并無(wú)差別。氯沙坦終濃度為10μmol/L時(shí)，LDH活性最低，明顯低于LY294002干預(yù)組，且與正常組無(wú)差別。 4． MDA含量：與正常組相比，H2

5、O2損傷組和LY294002干預(yù)組MDA含量明顯升高。與H2O2損傷組相比，氯沙坦各劑量組顯著降低MDA含量，但與LY294002干預(yù)組無(wú)差別。與LY294002干預(yù)組相比，氯沙坦高劑量組MDA含量明顯有差異。MDA含量隨氯沙坦的濃度上升而有下降趨勢(shì)，但各劑量組間無(wú)差別。 5． SOD活性：與損傷組相比，氯沙坦呈劑量依賴(lài)性提高SOD活性。損傷組和LY294002干預(yù)組相比并無(wú)差別。氯沙坦各劑量組間SOD活性無(wú)差別。氯沙坦高劑量組

6、與正常組無(wú)差別，且與LY294002干預(yù)組比明顯提高SOD活性。 6． Caspase3/7活性：與正常組相比，H2O2損傷組和LY294002干預(yù)組的Caspase3/7活性均明顯高升高，但這兩組間并無(wú)差別。與H2O2損傷組比，Caspase3/7活性明顯與氯沙坦?jié)舛扔幸蕾?lài)關(guān)系，其活性隨濃度的減少而增加。LY294002干預(yù)組Caspase3/7活性明顯高于氯沙坦高劑量組。 7．蛋白P-Akt表達(dá)：氯沙坦處理后，各劑量

7、組的p-Akt蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)，且有劑量依賴(lài)關(guān)系。表明氯沙坦可以通過(guò)Akt抑制H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷。 結(jié)論： 1．H2O2對(duì)心肌細(xì)胞產(chǎn)生損傷作用后，心肌細(xì)胞培養(yǎng)上清LDH活性、MDA含量和Caspase3/7活性上升，SOD減少，細(xì)胞生存率顯著下降。 2．氯沙坦劑量依賴(lài)性減少損傷心肌細(xì)胞培養(yǎng)上清的LDH活性、MDA含量和Caspase3/7活性，提高SOD活性，從而提高細(xì)胞生存率。 3．PI3K/Akt