土傳植物病害拮抗細(xì)菌根圍生態(tài)學(xué)研究.pdf

1、從浙江大學(xué)華家池蔬菜所和杭州市蔬菜所的老熟菜地土壤中分離到大量土著細(xì)菌,然后從中篩選出對(duì)Pythium aphanidermatum和Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum分別具有離體拮抗作用細(xì)菌分離物6株ZJ7、ZJ14、ZJ31、ZJ32S1、ZJ45和A2,進(jìn)一步通過(guò)促芽實(shí)驗(yàn)和無(wú)菌土盆栽測(cè)定,發(fā)現(xiàn)菌株ZJ14和ZJ32S1能促進(jìn)黃瓜種子的萌發(fā);6要菌株都能促進(jìn)黃瓜苗的生長(zhǎng)、增加苗干物質(zhì)重量.在接種引

2、起黃瓜苗期猝倒病(Pythium spp.)和中期枯萎病(Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum)的盆栽測(cè)定中,發(fā)現(xiàn)它們能明顯提高防病效果.根據(jù)格蘭氏染色反應(yīng)、生理生化測(cè)定和16S rDNA序列同源性比對(duì),鑒定了生防效果相對(duì)穩(wěn)定的4個(gè)菌株,分別為ZJ14(Bacillus subtilis),ZJ32S1(Bacillus subtilis),ZJ45(Pseudomonas aeruginosa)和A2

3、(Paenibacillus polymyxa).相對(duì)于革蘭氏陰性細(xì)菌定殖研究的蓬勃發(fā)展,革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌缺乏穩(wěn)定、高效的標(biāo)記系統(tǒng).而枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)由于其具有較強(qiáng)的抗逆性,在生物防治研究中越來(lái)越受到重視.為了進(jìn)一步研究生防枯草芽孢桿菌在植物根際的定殖情況,對(duì)其進(jìn)行標(biāo)記是有必要的.因此,根據(jù)綠色熒光蛋白基因和枯草芽孢桿菌木糖誘導(dǎo)型啟動(dòng)子PxylR序列,分別設(shè)計(jì)兩對(duì)特異引物xylR-F/R和GFPuv-F/

4、R,擴(kuò)增得到完整的xylR啟動(dòng)子序列和GFPuv基因序列后分別對(duì)上述產(chǎn)物做克隆,獲得pGEM-xylR和pGEM-gfp質(zhì)粒.對(duì)上述質(zhì)粒分別經(jīng)HindⅢ/Kpn Ⅰ雙酶切后連接,獲得質(zhì)粒pGEM-xylRGFP.經(jīng)SphI/KpnI雙切質(zhì)粒pGEM-xylRGFP后,回收片段xylR-gfp,插入穿梭載體pRP22,得到重組子pRP22-GFP.經(jīng)原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化B.subtilis 168和野生菌株CC41和ZJ32S1均得到有良好