26289.基于高分枝聚合物材料富集糖肽新方法的研究

1、安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文1基于高分枝聚合物材料富集糖肽新方法的研究中文摘要蛋白質(zhì)糖基化作為一種最常見的翻譯后修飾[1]。它不僅在蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性、溶解性、折疊和功能執(zhí)行方面起著關(guān)鍵的作用，而且參與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的運(yùn)輸、定位和分子識(shí)別[23]。此外，異常糖基化也已經(jīng)被證明和癌癥等疾病相關(guān)[45]，許多糖蛋白可以作為臨床生物標(biāo)志物和治療靶標(biāo)[6]。因此，糖蛋白和糖肽的分離、發(fā)現(xiàn)和鑒定變得越來越重要，它可以幫助我們更好地理解生物過程，尋找潛在的診

2、斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。依靠生物質(zhì)譜對(duì)糖肽規(guī)模化定性與定量分析，已成為當(dāng)前蛋白質(zhì)翻譯后修飾研究的一個(gè)重要研究方向。由于糖肽僅占所有酶解后肽段的小部分（2%~5%）[7]，其質(zhì)譜響應(yīng)很容易被高豐度非糖肽抑制。另外，糖鏈的微觀不均一性進(jìn)一步降低了糖肽的相對(duì)量而使得它們難以被質(zhì)譜檢測(cè)。因此，對(duì)于糖肽的特異性富集至關(guān)重要。凝集素[8]和抗體[9]是最重要的兩種親和富集方法，但具有穩(wěn)定性差，價(jià)格昂貴的缺點(diǎn)。分子排阻[10]、親水色譜[1112]、硼酸

3、富集[1314]也都廣泛應(yīng)用于糖肽的富集。但是，各種富集手段都存在一定的缺點(diǎn)，這些都使得糖蛋白組學(xué)的研究進(jìn)展相對(duì)于磷酸化、泛素化、乙酰化等其它翻譯后修飾，更為落后。近年來，酰肼固相提取[1516]法作為傳統(tǒng)的富集N糖蛋白糖肽的富集方法也備受關(guān)注。但是它也存在一些不可避免的缺點(diǎn)：樣品損耗大，步驟繁瑣。此外，最常用的商業(yè)化酰肼樹脂不僅價(jià)格高，而且在溶液中結(jié)合糖蛋白糖肽能力有限[17]。因此，目前依靠酰肼富集N糖蛋白糖肽的方法還有待完善。高分

4、枝聚合物由于其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)特性，如準(zhǔn)確的大小，內(nèi)部空腔，和各種同等功效功能基團(tuán)，顯示的性質(zhì)出與相應(yīng)線型分子完全不同[18]，如黏度低、溶解性好等，這些特性使其具有廣泛的應(yīng)用前景，近年來也成聚合物領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)[1920]，已有很多將其應(yīng)用到蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的例子[2123]。論文的第一章綜述了糖蛋白的研究意義和研究?jī)?nèi)容。第二章為探索性實(shí)驗(yàn)，探索了商品化樹枝狀聚合物PAMAM是否可以應(yīng)用于糖肽富集。研究提出了一種安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3H

5、ighBranchedPolymerfHighlyEfficientEnrichmentofGlycopeptideAbstractAsoneofthemostcommonposttranslationalmodification[1]proteinglycosylationnotonlyplayskeyrolesinthestabilitysolubilityfoldingfunctionexecutionofproteinsbuta

6、lsoisinvolvedintransptationlocalizationrecognitionofproteininvivo[23].Furthermeithasprovedthatabnmalglycosylationareassociatedwithdiseasescancer[45]manyglycoproteinsarealsoclinicalbiomarkerstherapeutictargets[6].Thusthes

7、eparationdetectionidentificationofglycoproteinsglycopeptidesareofgreatimptanceitcanhelpustounderstbiologicalprocessesbetteridentifymepotentialdiagnosticmarkerstherapeutictargets.Currentlyglycopeptidequalitativequantitati

8、vebasedonbiologicalspectrometrymassanalysishasbecomeanimptantfieldofresearchesonproteinposttranslationalmodifications.Sinceglycopeptidesusuallyexistinverylowabundance(2%~5%)inproteindigestion[7]theyareeasilyinterferedbyt

9、hehighlyabundanznonglycopeptideduringmassspectrometricanalysis.Inadditionthemicroheterogeneityofcarbohydratechainmayfurtherreducetherelativeamountofglycopeptidesmakesthemratherdifficulttobedetected.Therefetheiveenrichmen

10、tofglycoproteinsisofgreatimptance.Lectins[8]antibodies[9]aretwomajmoleculartoolsfiveenrichmentofglycoproteinglycopeptidesbutthesebiomoleculesaregenerallyexpensivehavepostability.Molecularexclusion[10]hyhilicchromatograph

11、y[1112]bicacidconcentration[1314]arealsowidelyusedintheenrichmentofglycopeptides.Howeverthesemethodsareallassociatedwithapparentdisadvantageswhichmakingprogressesinglycosylationresearchisrelativelydelayedthanotherposttra