雞組織中常山酮殘留的ELISA檢測方法和HPLC檢測方法研究.pdf

1、常山酮(Halofuginone,Hal)是一種應(yīng)用廣泛的抗球蟲藥,以3mg/kg的濃度添加到飼料中用于預(yù)防和治療家禽的球蟲病.該研究合成了常山酮免疫原,制備出針對常山酮的特異性多克隆抗體,建立了雞組織中常山酮殘留檢測的ELISA方法和HPLC方法,并研究了雞組織中常山酮的殘留消除.該研究建立了雞肝臟和肌肉組織中常山酮殘留檢測的ELISA方法.用三甲基硅烷咪唑(TMSI)將常山酮結(jié)構(gòu)中的羥基選擇性保護,在溫和的條件下使常山酮結(jié)構(gòu)中的氨基

2、琥珀酰化.最后在酸性條件下水解保護基團,得到半抗原常山酮琥珀酸衍生物.以NHS活性酯法制備了常山酮免疫原和包被原,偶聯(lián)比率分別為9:1和5:1.ELISA方法的線性檢測范圍為0.1ng/ml-100ng/ml,以50ng/g、100ng/g和500ng/g的濃度水平添加時,雞肝臟組織的平均添加回收率范圍為74.2﹪-96.8﹪,日內(nèi)變異系數(shù)范圍為3.8﹪-12.8﹪,日間變異系數(shù)范圍為8.8﹪-15.9﹪;雞肌肉組織的平均添加回收率范圍

3、為74.3﹪-90.0﹪,日內(nèi)變異系數(shù)為2.6﹪-16.6﹪,日間變異系數(shù)在5.4﹪-6.8﹪.該方法在雞肝組織和肌肉組織中的檢測限分別為23ng/g和15ng/g.該研究建立了雞肝臟和肌肉組織中常山酮殘留檢測的HPLC方法.用胰蛋白酶水解組織樣品,乙酸乙酯提取,0.125mol/L乙酸銨緩沖液反提,Oasi<'(R)>HLB柱凈化,HPLC測定.以50ng/g、100 ng/g和500 ng/g濃度水平添加時,雞肝臟組織的平均添加回收

4、率范圍在81.3﹪-93.3﹪之間,日內(nèi)變異系數(shù)范圍在1.5﹪-10.9﹪之間,日間變異系數(shù)范圍在2.7﹪-6.1﹪之間;雞肌肉組織的平均添加回收率范圍在88.4﹪-103.4﹪之間,日內(nèi)變異系數(shù)范圍在1.4﹪-11.6﹪之間,日間變異系數(shù)范圍在4.6﹪-12.6﹪之間.該方法在雞肝臟和肌肉組織中的檢測限分別為19ng/g和23ng/g.該研究對ELISA方法和HPLC方法進行了比較.ELISA方法和HPLC方法測定雞肝臟和肌肉組織中常

5、山酮殘留有良好的相關(guān)性.在添加回收試驗中,兩種方法在雞肝臟和肌肉組織中測得常山酮的實測值的相關(guān)系數(shù)分別為0.9760和0.9344.以3mg/g劑量的氫溴酸常山酮混飼給予AA肉雞10天,停藥第0天時,ELISA方法測得雞肝臟組織中常山酮的殘留量為105.2ng/g,HPLC方法測得雞肝臟組織中常山酮的殘留量為84.6ng/g;停藥第3天后,常山酮的殘留量均低于兩種方法的檢測限.在停藥第0天時,雞肌肉組織中常山酮的殘留量就低于檢測限.用E