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文檔簡介
1、本試驗(yàn)選用吉林德大養(yǎng)雞場一日齡肉仔雞60只進(jìn)行飼養(yǎng),肉仔雞隨機(jī)分成3組,每組20只,分別作為空白組、空白添加組,供試組取樣材料。飼養(yǎng)7周后分別取不同的組織進(jìn)行不同處理后檢測。采用柱前衍生化方法、紫外檢測器的高效液相色譜法(HPLC)檢測雞組織中鏈霉素的殘留量,優(yōu)化了樣品的前處理方法和高效液相色譜條件(包括流動相的組成和流速),同時優(yōu)化了前處理過程中洗脫液和提取液的用量。試驗(yàn)方法的建立主要包括衍生化試劑的選擇、衍生化條件和檢測波長的確定、
2、衍生化產(chǎn)物穩(wěn)定性的研究、色譜條件的建立、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備和加標(biāo)回收試驗(yàn)。色譜條件的建立包括對流動相的組成、比例、流速、緩沖液PH值、柱溫和進(jìn)樣量的確定。結(jié)果表明: (1)通過試驗(yàn)確定了1,2-萘醌-4-磺酸鈉和氫氧化鈉為最佳衍生化試劑,在45℃條件下反應(yīng)10min衍生化完全,并且在252nm波長處有特征性的最大吸收,衍生化產(chǎn)物在5h內(nèi)相對穩(wěn)定。 (2)色譜條件通過對各項(xiàng)參數(shù)的篩選,表明:流動相為V(乙腈):V(醋酸鹽緩沖液
3、pH=3.3):V(水)=10:10:80,流速0.3mL/min,緩沖液PH值為3.3,柱溫35℃,檢測波長252nm,進(jìn)樣量20μl為最佳檢測條件。 (3)前處理?xiàng)l件的篩選主要針對沉淀劑和洗脫液用量不同,篩選最佳用量。結(jié)果表明:采用沉淀劑(5﹪5ml三氯醋酸)沉淀蛋白質(zhì),洗脫劑(10mL甲醇)洗脫,3種不同組織添加不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液時測定回收率為添加200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL濃度時平均回收率分別為75﹪
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