

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、雞沙門菌病在我國仍然廣泛流行,嚴重危害養(yǎng)雞業(yè)。外表健康的患雞容易向外排菌,使雞蛋、雞肉等產品遭受污染,給食品安全和公眾健康帶來一定的危險,容易造成人食物中毒。
由于沙門菌感染后能終身帶菌,并可通過種蛋垂直傳給雛雞,因此鑒定并淘汰陽性種雞十分必要。長期以來,養(yǎng)雞場一直使用玻板凝集試驗檢測淘汰患雞白痢、雞傷寒的病雞,但是該方法敏感性有限,經常漏檢。感染雞間歇性排毒或不排毒,使得傳統(tǒng)分菌的方法不夠敏感。感染性沙門菌血清型眾多,傳
2、統(tǒng)ELISA方法不能滿足實際需求。
沙門菌InvJ蛋白是廣泛存在于沙門菌中的保守蛋白,使用該蛋白檢測沙門菌抗體,可以有效地檢出被沙門菌感染的雞。因此,本試驗采用分子克隆方法,得到InvJ蛋白,將其作為檢測抗原,研制出能檢測沙門菌InvJ抗體的間接ELISA方法,現(xiàn)將結果報告如下。
1.沙門菌InvJ基因的克隆與融合蛋白的表達同源性分析顯示沙門菌InvJ蛋白和其他細菌的蛋白同源性低,在沙門菌中是一個保守蛋白。根
3、據(jù)Genbank(CP003047)上公布的雞傷寒/白痢沙門菌InvJ序列設計引物,成功在腸炎沙門菌標準株(CVCC3375)中擴增得到InvJ基因,將該基因連接到pET-28a(+)表達載體,構建融合質粒pET-in4,將該質粒轉入大腸桿菌BL21(DE3)中,成功誘導出融合蛋白。Western-blot結果顯示該蛋白具有良好的免疫原性。
2.檢測沙門菌InvJ抗體的間接ELISA方法的建立使用純化后的融合蛋白包被酶標板
4、,建立間接ELISA方法,經試驗確定最佳檢測條件:包被濃度為0.17μg/mL,包被液為磷酸鹽緩沖液(20mmol/L,pH7.0),4℃包被12h,使用5%脫脂奶粉作為封閉液,37℃封閉90min,使用PBST將待檢血清稀釋800倍檢測,血清孵育時間為45min,二抗孵育時間45min,顯色時間為15min,陽性臨界值為0.162。
重復性試驗結果顯示該方法重復性良好。使用所建方法對9個雞場655份血清進行了檢測,陽性率
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 檢測鴨源沙門氏菌抗體間接ELISA方法的建立與應用.pdf
- 雞鮑氏志賀菌疫苗免疫抗體間接ELISA定量檢測方法的建立及應用.pdf
- 檢測鴨沙門氏菌抗原的間接夾心ELISA方法的建立及應用.pdf
- 牛副結核抗體間接ELISA檢測方法的建立.pdf
- 沙門氏菌間接ELISA抗體檢測方法的建立及重組豬痘活載體疫苗的研制.pdf
- 牛源金葡菌抗體檢測間接ELISA方法的建立與應用.pdf
- 綿羊邊界病病毒的分離鑒定與抗體間接ELISA檢測方法的建立.pdf
- 豬流產嗜性衣原體病間接ELISA抗體檢測方法的建立.pdf
- 牛結核病特異抗體間接ELISA檢測方法的建立及初步應用.pdf
- 禽腸炎沙門氏菌抗體ELISA檢測方法的研究.pdf
- 雞志賀氏菌病平板凝集試驗和間接ELISA診斷方法的建立及應用.pdf
- 檢測GPV抗體的間接ELISA方法的建立及初步應用.pdf
- 勞森氏胞內菌的PCR檢測方法及其抗體間接ELISA檢測方法的建立與應用.pdf
- 鯽魚IgM單鏈抗體的制備及嗜水氣單胞菌抗體間接ELISA檢測方法的建立.pdf
- 沙門菌多重PCR檢測方法的建立及雞白痢沙門菌aroA缺失株的構建.pdf
- 豬流行性腹瀉病毒抗體間接ELISA檢測方法的建立.pdf
- 間接ELISA檢測林麝源銅綠假單胞菌抗體方法的建立及應用評估.pdf
- 檢測犬狂犬病毒抗體的間接ELISA方法的建立.pdf
- 以重組NP為抗原GPMV抗體間接ELISA檢測方法的建立.pdf
- 兔出血癥病毒RPA檢測方法的建立及間接ELISA檢測抗體的研究.pdf
評論
0/150
提交評論