48290.大鼠胰腺β細胞分泌調(diào)控機制的研究

1、華中科技大學博士學位論文大鼠胰腺β細胞分泌調(diào)控機制的研究姓名：萬群芳申請學位級別：博士專業(yè)：生物物理指導教師：徐濤20050429II雖然它們也同時增加RRP的大小，但增加的程度要比HCSP要小一些。不同的PKC或者PKA抑制劑能夠阻止PMA或fskolin引起的HCSP和RRP的增強效應。這表明HCSP代表了一類對鈣離子高度敏感的分泌過程，并能被PKA和PKC的激活明顯增強，在表觀上表現(xiàn)為增加了分泌對鈣離子的敏感性。同時也表明蛋白激酶

2、A和C確實在胰島素的分泌過程中起重要的調(diào)控作用。用各種不同的PKC亞型的抑制劑處理β細胞后的結果表明在胰島素分泌的調(diào)控中，PKCα參與了HCSP增強效應的調(diào)節(jié)過程。PKA和PKC對HCSP的作用并沒有疊加，表明在它們信號傳遞的下游有著相同的作用機制。這提示在胰島素的分泌過程中PKA和PKC的作用底物可能相同。通過應用細胞膜去極化和光解釋放鈣離子的聯(lián)合刺激，我們還發(fā)現(xiàn)HCSP是與那些同鈣通道耦聯(lián)的囊泡不同的一類特殊的囊泡庫。因此我們認為P

3、KA和PKC之所以促進分泌是因為他們可以增加高度鈣敏感的囊泡數(shù)量。（3）Syntaxin1A(Stx1A)和Munc18a在囊泡的轉運和細胞分泌中發(fā)揮著關鍵的調(diào)控作用。實驗采用Confocal和寬場熒光顯微鏡技術研究了在胰島素分泌細胞系INS1以及非分泌細胞系中國倉鼠卵巢細胞（CHO）中Stx1A和Munc18a的胞內(nèi)定位和相互作用。結果發(fā)現(xiàn)在INS1細胞膜上Munc18a與Stx1A呈簇狀共定位分布，但是不與Stx1A的氨基端Habc

4、結構域缺失突變體（Stx1AΔHabc）共定位，表明Stx1A的Habc結構域在Stx1A與Munc18a相互作用以及Munc18a在膜上定位中起著至關重要的作用。在沒有內(nèi)源性Stx1A表達的CHO細胞中，EGFP標記的Stx1A不能定位到細胞膜上，即使與Munc18a共表達也不能定位到細胞膜上，表明Stx1A轉運到細胞膜并不是必需依賴于Munc18。此外，應用FRET技術檢測到了EGFPStx1A與Munc18aTdimer2之間的相

5、互作用，但是Stx1ADM（Stx1A的一種能保持開放構型的雙點突變體，Stx1AL165AE166A，Stx1ADM）盡管與Munc18a共定位分布，卻沒有觀察到明顯的FRET的發(fā)生，而Munc18aTdimer2與EGFPStx1AΔHabc之間沒有發(fā)生FRET。表明Munc18a與Stx1A以及Stx1ADM之間可能具有不同的作用方式，也證明了Stx1A氨基端Habc結構域在Stx1A與Munc18a之間的相互作用中發(fā)揮著至關重要