應(yīng)用脫羰秋水仙堿誘導(dǎo)去核法進行小鼠體細胞核移植的研究.pdf

1、在核移植過程中,供體核(karyoplast)與受體胞質(zhì)(cytoplast)是重構(gòu)胚的兩個重要組件,尤其后者對于促進核重塑及胚胎進一步發(fā)育至關(guān)重要.目前,人們主要是通過顯微操作機械性的去除核染色質(zhì)來獲得受體胞質(zhì).但該方法卻存在著技術(shù)要求高,耗費時間長,對細胞損傷大的缺點.近年來有人嘗試應(yīng)用化學(xué)試劑誘導(dǎo)去除卵母細胞染色質(zhì),簡稱誘導(dǎo)去核(IE,Induced-enucleation).國外多家實驗室對該方法進行了一系列的研究,但并未對影響

2、誘導(dǎo)去核率的各因素作系統(tǒng)分析,且目前國內(nèi)尚無相關(guān)報道.因此該研究的主要目的是優(yōu)化脫羰秋水仙堿(Deme,Demecolcine)誘導(dǎo)去核程序,通過在昆明白小鼠上探索性的研究,為應(yīng)用該方法進行大動物卵母細胞去核提供一定的資料和經(jīng)驗.在已有Deme誘導(dǎo)去核技術(shù)路線的基礎(chǔ)上,以昆明白小鼠卵母細胞為實驗材料,對影響去核率的幾個因素(包括Deme濃度、Deme處理起始時間和作用時間、卵母細胞的卵齡)逐次進行實驗.結(jié)果表明:激活卵母細胞在濃度為0.

3、4 μg/mL和0.5 μg/mL Deme-KSOM液中處理60 min的去核率分別為27.3%、33.3%,二者之間差異不顯著,但與0.6 μg/mL組(11.9%)相比差異顯著.卵母細胞在0~5 min之內(nèi)迅速放入0.5 μg/mL Deme-KSOM液中,處理60~180 min得到了相對較高的去核率(31.9%~24.5%).且激活后0 min起始Deme處理并作用60 min獲得了最高的去核率(31.9%),顯著高于作用30

4、 min時的去核率(11.5%),但與作用90min、180 min的去核率(29.3%,28.5%)相比差異不顯著.激活后10~15 min之內(nèi)進行不同時間Deme處理均取得了相對較低的去核率(5.7%~12.0%).卵齡為17~18 h的昆明白小鼠卵母細胞在激活后迅速放入0.5 μ g/mL Deme-KSOM液中處理60 min,其去核率為27.1%顯著的高于14~15 h和20~21 h組(7.3%,14.1%).依據(jù)優(yōu)化的De