大熊貓犬冠狀病毒的分離鑒定及S基因部分序列的測定和分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該研究從某動物園兩只死亡大熊貓的肝、脾等臟器分離病毒,經(jīng)MDCK細胞適應培養(yǎng),獲得一株病毒(命名為DXMV),在該細胞上可形成有規(guī)律的病變.電鏡負染觀察,病毒粒子有冠狀纖突;超薄切片觀察,于胞漿內形成病毒包涵體.分子生物學研究方面,先選用多聚酶區(qū)冠狀病毒通用引物2Bp和4Bm,該引物含有多個兼并堿基,能擴增出11種冠狀病毒;合成該引物,選擇大熊貓肝組織原代病料和該分離病毒的各代細胞培養(yǎng)物,均成功地擴增出了目的片段,而未接毒FCWF對照細

2、胞PCR擴增陰性;在此基礎上,又選擇犬冠狀病毒特異性引物,該引物是一種套式(Nested)引物,位于S基因201-1286bp之間,包括兩對引物,CCVF1-CCVR1;CCVF2-CCVR2.第一對引物為外層引物,可擴增出1 086bp的核酸片段;第二對引物為內層引物,可擴增出515bp的核酸片段.該研究首次從大熊貓體內分離和鑒定了CCV,揭示大熊貓亦可感染CCV,從而為大熊貓的疾病防治工作提供了必要的信息和資料,同時也豐富了冠狀病毒

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