大熊貓犬冠狀病毒的分離鑒定及S基因部分序列的測定和分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該研究從某動(dòng)物園兩只死亡大熊貓的肝、脾等臟器分離病毒,經(jīng)MDCK細(xì)胞適應(yīng)培養(yǎng),獲得一株病毒(命名為DXMV),在該細(xì)胞上可形成有規(guī)律的病變.電鏡負(fù)染觀察,病毒粒子有冠狀纖突;超薄切片觀察,于胞漿內(nèi)形成病毒包涵體.分子生物學(xué)研究方面,先選用多聚酶區(qū)冠狀病毒通用引物2Bp和4Bm,該引物含有多個(gè)兼并堿基,能擴(kuò)增出11種冠狀病毒;合成該引物,選擇大熊貓肝組織原代病料和該分離病毒的各代細(xì)胞培養(yǎng)物,均成功地?cái)U(kuò)增出了目的片段,而未接毒FCWF對照細(xì)

2、胞PCR擴(kuò)增陰性;在此基礎(chǔ)上,又選擇犬冠狀病毒特異性引物,該引物是一種套式(Nested)引物,位于S基因201-1286bp之間,包括兩對引物,CCVF1-CCVR1;CCVF2-CCVR2.第一對引物為外層引物,可擴(kuò)增出1 086bp的核酸片段;第二對引物為內(nèi)層引物,可擴(kuò)增出515bp的核酸片段.該研究首次從大熊貓?bào)w內(nèi)分離和鑒定了CCV,揭示大熊貓亦可感染CCV,從而為大熊貓的疾病防治工作提供了必要的信息和資料,同時(shí)也豐富了冠狀病毒

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