鹽脅迫下三角梅葉片相關(guān)生理變化及SOD基因的克隆分析.pdf

1、三角梅（Bougainvillea spp.）是我國南方地區(qū)重要的園林綠化樹種，本研究以一年生三角梅扦插苗伊麗莎白·安格斯(Bougainvillea glabra‘Elizabeth Angus’，俗稱紫花三角梅)和柔森卡(Bougainvillea×buttiana‘Rosenka’，俗稱水紅三角梅)為材料，用不同的鹽濃度分別對(duì)2個(gè)品種三角梅進(jìn)行脅迫處理，測(cè)定了三角梅2個(gè)品種葉片的在鹽脅迫過程中電解質(zhì)外滲率、MDA、脯氨酸、保護(hù)酶等

2、相關(guān)生理變化，探討三角梅耐鹽性指標(biāo)變化及差異；用液相色譜法對(duì)三角梅葉片中一些內(nèi)源激素進(jìn)行測(cè)定，研究三角梅在鹽脅迫過程中激素含量的變化與鹽脅迫的關(guān)系；同時(shí)用RACE的方法對(duì)三角梅葉片中SOD基因家族進(jìn)行比較系統(tǒng)的克隆，為三角梅抗逆性研究提供分子生物學(xué)基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：
　　1.以一年生紫花三角梅和水紅三角梅扦插苗為材料，用0.2％-0.6%的鹽分別對(duì)2個(gè)品種三角梅進(jìn)行脅迫處理，結(jié)果表明，三角梅葉片的膜穩(wěn)定性、保護(hù)酶活性、滲透調(diào)

3、節(jié)物質(zhì)含量，隨處理時(shí)間和濃度的變化而規(guī)律變化。水紅三角梅葉片中電解質(zhì)外滲率、丙二醛、脯氨酸含量明顯增加，并隨時(shí)間及鹽濃度的上升而增大，可溶性蛋白含量表現(xiàn)為先升后降，SOD的POD活性不斷增高，CAT活性降低；紫花三角梅則表現(xiàn)為電解質(zhì)外滲率、丙二醛、脯氨酸含量增加，并隨時(shí)間及鹽濃度的上升而增大，可溶性蛋白含量先增大后減小的趨勢(shì)，SOD的POD活性先增高后下降，CAT活性降低。在脅迫過程中，紫花三角梅的上述各指標(biāo)的變化較水紅三角梅敏感，其上

4、升下降的幅度更大，變化大于水紅三角梅。因此電解質(zhì)外滲率、丙二醛、脯氨酸與三角梅耐鹽性密切相關(guān)。
　　2.利用液相色譜法對(duì)鹽脅迫過程中三角梅葉片激素含量的變化進(jìn)行了測(cè)定。水紅三角梅葉片中ABA含量在鹽脅迫下增大，0.4%和0.6%的鹽處理下極顯著性增大，GA3含量表現(xiàn)為先增長(zhǎng)后下降的趨勢(shì)，IAA含量不斷減少；紫花三角梅ABA、GA3和IAA含量變化與水紅三角梅相似，在0.6%的鹽處理下紫花三角梅中GA3的含量遠(yuǎn)大于水紅三角梅，形態(tài)學(xué)

5、表現(xiàn)為多數(shù)葉片黃化脫落。因此認(rèn)為GA3的含量的變化與三角梅耐鹽性關(guān)系密切。
　　3.采用同源克隆的方法，利用RACE技術(shù)對(duì)三角梅SOD基因家族不同類型基因進(jìn)行cDNA的克隆，結(jié)果如下：
　　CSD（Cu/ZnSOD）基因的克?。汗驳玫酵暾馁|(zhì)胞型CSD序列共8個(gè)，其中cyCSD1型4個(gè)，具有相同的ORF區(qū)，長(zhǎng)585bp，編碼195個(gè)氨基酸，
　　3’UTR長(zhǎng)度為147bp-237bp不等，5’UTR長(zhǎng)度均為55bp；c

6、yCSD2型4個(gè)，具有相同的ORF區(qū)，長(zhǎng)543bp，編碼180個(gè)氨基酸，3’UTR長(zhǎng)度為147bp-237bp不等，5’UTR長(zhǎng)度均為43bp。葉綠體型CSD1個(gè)，僅獲得其保守區(qū)域部分片段，長(zhǎng)428bp。通過Blast在線比對(duì)分析，cyCSD與菠菜質(zhì)胞型Cu/ZnSOD相似度84%、冰葉日中花質(zhì)胞型Cu/ZnSOD相似度82%，chCSD與墻生藜葉綠體Cu/ZnSOD相似度89%、與鹽角草葉綠體Cu/ZnSOD相似度87%，認(rèn)為兩者均是

7、三角梅的Cu/ZnSOD序列。
　　FSD（FeSOD）基因的克?。汗驳玫饺~綠體型FSD片段一個(gè)，長(zhǎng)841bp。經(jīng)在線blast比對(duì)分析，與Genbank上已登陸的葡萄和龍眼FSD的相似度分別達(dá)到85%和78%，認(rèn)為是三角梅的FSD序列。
　　MSD（MnSOD）基因的克?。汗驳玫酵暾木€粒體型MSD序列全長(zhǎng)共3條，具有相同的ORF，ORF長(zhǎng)度為711bp，編碼236個(gè)氨基酸，3’UTR長(zhǎng)度282bp-314bp，5’UTR