光皮樺成花相關(guān)SPL基因的克隆、表達(dá)及功能分析.pdf

1、SBP-box基因家族是植物特有的一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子基因家族，廣泛存在于綠色植物中，在成花過(guò)程中起關(guān)鍵的調(diào)控作用。本研究以珍貴用材樹(shù)種光皮樺為材料，采用RACE的方法，克隆獲得光皮樺的13個(gè)SPL基因，通過(guò)生物信息學(xué)、亞細(xì)胞定位、熒光定量PCR分析和酵母雙雜交等手段，對(duì)其進(jìn)行了功能分析，獲得以下主要結(jié)果。
　　1.序列分析結(jié)果顯示，BlSPL5的ORF最長(zhǎng)，達(dá)到3249bp，編碼1082個(gè)氨基酸；BlSPL3的ORF最短，僅為450bp

2、，編碼149個(gè)氨基酸；在這些光皮樺SPL轉(zhuǎn)錄因子的N端均具有一個(gè)保守的SBP結(jié)構(gòu)域，僅在BlSPL4、BlSPL5和BlSPL12的C端含有一個(gè)較保守的ANK結(jié)構(gòu)域。系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果顯示，這13個(gè)BlSPLs分別屬于陸地植物SPL基因的8個(gè)不同分支。
　　2.采用RLM-RACE的方法，對(duì)BlSPL1、3、6、7、8、9和11的miR156/157剪切位點(diǎn)進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果顯示，除BlSPL8的剪切位點(diǎn)在miR156/157的11/

3、12位外，其余BlSPLs的剪切位點(diǎn)均在10/11位，說(shuō)明它們的剪切模式有比較強(qiáng)的一致性；而在剪切發(fā)生的位點(diǎn)，除BlSPL9外其余SPL基因均有1個(gè)堿基miR156/157錯(cuò)配。
　　3.利用洋蔥表皮細(xì)胞對(duì)部分BlSPL基因進(jìn)行了亞細(xì)胞定位分析，結(jié)果顯示，miR156靶標(biāo)的BlSPL1和3均定位于細(xì)胞核，符合轉(zhuǎn)錄因子的定位特征。
　　4.熒光定量PCR分析結(jié)果表明，BlSPL1、2、5、11、13在雄花序中高表達(dá)，推測(cè)它們與