小菜蛾泛素基因克隆、表達(dá)及功能分析.pdf

1、小菜蛾P(guān)lutella xylostella(L.)屬鱗翅目菜蛾科，是十字花科蔬菜的主要害蟲(chóng)之一。由于在生產(chǎn)上用藥頻繁，加之小菜蛾生活史的特殊性，它對(duì)多種殺蟲(chóng)劑都產(chǎn)生了抗藥性，已成為世界上最難防治的害蟲(chóng)之一，所以對(duì)小菜蛾的抗性機(jī)理研究就顯得尤為重要。
　　 Cheng L G.等采用改進(jìn)的cDNA 代表性差異分析法(RDA）篩選出了小菜蛾抗藥性品系和敏感品系間的差異性表達(dá)片斷。其中1個(gè)序列與已知泛素基因有較高同源性。為了進(jìn)一步研

2、究泛素基因與小菜蛾抗藥性形成之間的關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)克隆了小菜蛾P(guān)lutella xylostella（L.）抗溴氰菊酯品系和敏感品系的雌雄成蟲(chóng)基因組中分別克隆了泛素基因的編碼區(qū)，并利用熒光定量PCR和western blot技術(shù)分析不同品系小菜蛾泛素基因的表達(dá)情況。主要研究結(jié)果如下：
　　 1. 設(shè)計(jì)一對(duì)簡(jiǎn)并引物，從小菜蛾P(guān)lutella xylostella（L.）抗溴氰菊酯品系和敏感品系的雌雄成蟲(chóng)基因組中分別克隆了泛素基因的編碼

3、區(qū)，GenBank 登錄號(hào)分別為EU28778，EU28779，EU28780，EU28781。序列分析表明，該基因的長(zhǎng)度為228bp，編碼的多肽由76個(gè)氨基酸組成。不同品系和不同性別的小菜蛾泛素基因的核苷酸序列、氨基酸序列等均存在差異，其中敏感品系雌雄成蟲(chóng)間差異較大，序列相似性為81.1％；抗性品系雌雄成蟲(chóng)間差異較小，序列相似性為97.8％。推測(cè)這些差異可能與小菜蛾抗藥性的形成有關(guān)。
　　 2.為進(jìn)一步研究泛素基因與小菜蛾抗藥

4、性形成之間的關(guān)系，從小菜蛾P(guān)lutella xylostella（L.）抗溴氰菊酯品系和敏感品系的雌雄成蟲(chóng)mRNA 中克隆泛素基因表達(dá)片段，GenBank 登陸號(hào)分別為：EU860162，EU860163，EU860164和 EU860165。利用熒光定量PCR 技術(shù)分析不同品系小菜蛾泛素基因的表達(dá)情況，表達(dá)量從高到低的順序依次為：敏感品系雌性樣本（SF）、敏感品系雄性樣本（SM）、抗溴氰菊酯品系雌性樣本（DRF）、抗溴氰菊酯品系雄性樣