半夏塊莖誘導條件優(yōu)化及其生物堿含量研究.pdf

1、半夏為天南星科半夏屬多年生草本植物，以塊莖入藥。半夏的人工栽培繁殖力較低，再加上半夏常常會因染病毒而引起其品種質量的退化，致使半夏種源常常不能供應生產的需求。目前，由于對半夏塊莖次生代謝方面研究的不足，其塊莖生長的人工調控技術發(fā)展得十分緩慢，致使半夏生產的發(fā)展受到了嚴重的制約。因此，很有必要進行半夏塊莖的相關研究。
　　經過本研究，得出了以下研究結果：
　　(1)經過進行半夏組織離體培養(yǎng)及植株再生體系的建立這一部分的試驗，得

2、出：用MS+6-BA1.0 mgL-1+ IAA0.5 mgL-1培養(yǎng)基可以快速擴繁半夏的外植體。半夏外植體用此培養(yǎng)基培養(yǎng)，很快便能在葉柄兩端形成膨大的塊莖，這對于快速獲得半夏塊莖極有意義。半夏塊莖形成之后，塊莖擴增繁殖，并很快開始分化形成葉子。再剪去半夏新長出的葉子，當植株再生長的時候，葉子長得更快更多，根系也得以快速生長，此方法能夠讓半夏組培苗在短時間內長出葉子和根系。本試驗后續(xù)進行的研究要通過半夏葉柄誘導形成小塊莖，而此時培養(yǎng)的半

3、夏組培苗能夠提供足夠的半夏葉柄。因此，進行半夏植株再生體系的優(yōu)化研究尤為重要。
　　(2)經過進行半夏試管小塊莖的誘導這一部分的試驗，得出：用半夏葉柄倒置培養(yǎng)的方式可獲得遺傳穩(wěn)定的未分化狀態(tài)的半夏小塊莖。隨著時間的積累，半夏試管小塊莖逐漸形成，培養(yǎng)25 d的效果最好，培養(yǎng)30 d時，半夏試管小塊莖開始分化，長出白色的根，此時的小塊莖已不適合作為懸浮培養(yǎng)材料，因此，培養(yǎng)25d的半夏小塊莖是最佳的試驗材料。在MS培養(yǎng)基中，半夏葉柄倒置

4、培養(yǎng)，能夠長出試管小塊莖，同時葉柄保持綠色，并增粗。而不進行倒置培養(yǎng)的半夏葉柄不形成小塊莖，而且葉柄在培養(yǎng)的同時也會逐漸枯萎。
　　(3)經過進行水楊酸刺激下半夏試管小塊莖懸浮培養(yǎng)體系的建立這一部分的試驗，得出：未經水楊酸處理的對照組半夏懸浮塊莖的鮮重、干重隨著時間的增加而增加，這說明半夏懸浮塊莖的生物量是不斷積累的。處理組在0~10d時，懸浮培養(yǎng)的半夏塊莖的鮮重、干重增長量均較小，推測可能是外源添加的水楊酸導致半夏試管塊莖不能很

5、好地適應環(huán)境的變化，造成半夏懸浮培養(yǎng)塊莖生長抑制，導致半夏試管塊莖的鮮重、干重增長緩慢。由此可知：外源添加的水楊酸對半夏懸浮塊莖的生長有一定的影響。
　　(4)經過進行高效液相色譜法測定水楊酸刺激下半夏生物堿的含量這一部分的試驗，得出：在流動相的選擇中，甲醇∶超純水=5∶95是流動相配比中最佳的選擇。在檢測波長的選擇中，254 nm的波長為其波長的最佳選擇。通過使用Agilent1200高效液相色譜儀測定水楊酸刺激下半夏樣品中鳥苷