產(chǎn)吲哚咔唑生物堿海洋生境鏈霉菌的育種與培養(yǎng)條件優(yōu)化.pdf

1、采用生物與化學(xué)相結(jié)合的方法對吲哚咔唑生物堿產(chǎn)生菌進(jìn)行了相關(guān)研究，主要包括菌種的選育、高產(chǎn)菌株培養(yǎng)條件的優(yōu)化及菌株質(zhì)粒的驗(yàn)證。以本實(shí)驗(yàn)室菌種庫所保藏菌株T1-28為出發(fā)菌株，經(jīng)過紫外誘變、紫外氯化鋰復(fù)合誘變、亞硝酸多次誘變，以高效液相色譜中星形孢菌素產(chǎn)量為指標(biāo)，最終選出兩株遺傳特性穩(wěn)定的高產(chǎn)菌株TUV10-5和TN20-12，其星形孢菌素的產(chǎn)量比原始菌株分別提高912.71％和882.31％。對高產(chǎn)菌株L25-1進(jìn)行紫外誘變、紫外氯化鋰復(fù)

2、合誘變、亞硝酸多次反復(fù)誘變，以高效液相色譜中星形孢菌素產(chǎn)量為指標(biāo)，選育出高產(chǎn)菌株5L-N15-1，產(chǎn)量提高了91.31％。
　　對實(shí)驗(yàn)室前期篩選的高產(chǎn)菌株L25-1進(jìn)行了培養(yǎng)基調(diào)控，選用了6種不同的培養(yǎng)基，發(fā)現(xiàn)在ISP5培養(yǎng)基中，該菌株產(chǎn)生星形孢菌素的量最大。菌株發(fā)酵產(chǎn)物中，菌體星形孢菌素的含量比菌液中高。甘油與L-天門冬酰胺對星形孢菌素的產(chǎn)量分別都有一定的影響，但是聯(lián)合使用產(chǎn)量較高。液體培養(yǎng)時，添加了甘油的改良高氏一號培養(yǎng)基與對

3、照差別不是很大，但添加了L-天門冬酰胺的生長狀況卻發(fā)生了明顯的變化，菌體顯示出淺綠色。后又進(jìn)行了固體培養(yǎng)基比較，L-天門冬酰胺對該菌株的菌落形態(tài)影響不大。
　　優(yōu)化原生質(zhì)體制備與再生的條件，經(jīng)過正交實(shí)驗(yàn)所確定最優(yōu)組合是:甘氨酸濃度1.0％，蔗糖濃度0.2M，酶濃度1mg/mL。將L25-1與放線菌UV2m-5、H10-5以及T1-28融合，得到一株融合菌株，產(chǎn)量提高75.51％。
　　采用高溫及吖啶橙處理的方法對L25-1進(jìn)