北冬蟲夏草多糖對(duì)CCl4致小鼠急性肝損傷的影響.pdf

1、通過北冬蟲夏草多糖對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷的肝臟結(jié)構(gòu)和功能影響的研究，探討北冬蟲夏草多糖的作用機(jī)理，為進(jìn)一步研究北冬蟲夏草多糖對(duì)動(dòng)物的保健，尤其在保肝方面的應(yīng)用與推廣提供科學(xué)資料和理論依據(jù)。
　　本試驗(yàn)采用水提醇沉法的工藝改良提取北冬蟲夏草多糖。通過設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)L9(34)優(yōu)化北冬蟲夏草多糖提取條件，以苯酚-硫酸法測(cè)定多糖含量，得出最佳提取工藝的條件及提取率為：提取時(shí)間3 h，料液溫度80℃，料液比1︰30，提取率為17.1

2、4％。
　　試驗(yàn)的設(shè)計(jì)與實(shí)施。將120只雄性昆明種小鼠實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性喂養(yǎng)1 W后，隨機(jī)分為試驗(yàn)A組、試驗(yàn)B組。A組、B組均設(shè)空白對(duì)照組，CCl4模型組，北冬蟲夏草多糖低劑量組70 mg·(kg.d)-1、中劑量組140 mg·(kg.d)-1、高劑量組280 mg·(kg.d)-1，聯(lián)苯雙酯陽性對(duì)照組140 mg·(kg.d)-1，每組小鼠10只。除空白組、模型組以外，其它各組都以相應(yīng)藥物(按0.2mL·20g-1)灌胃。在喂藥的第

3、8 d、第11 d和第14 d，除空白對(duì)照外，各試驗(yàn)小鼠均以(0.2mL·20g-1)的0.2%CCl4花生油灌胃。A組在第14 d CCl4花生油灌胃16 h后，所有參試小鼠眼球放血并脫頸致死，分別剖檢與取材。B組繼續(xù)灌藥2W后眼球放血和脫頸致死，分別剖檢與取材。參試小鼠的血清檢測(cè)指標(biāo)有：AST、ALT、ALP、總膽紅素以及N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)；肝均漿測(cè)定的有：SOD、GSH、MDA；肝臟組織顯微結(jié)構(gòu)的觀察

4、和肝組織細(xì)胞凋亡的檢測(cè)，較為系統(tǒng)研究了北冬蟲夏草多糖對(duì)CCl4所致小鼠急性肝損傷在結(jié)構(gòu)和功能的影響，為北冬蟲夏草多糖的保肝、保健以及在獸醫(yī)臨床與動(dòng)物養(yǎng)殖上的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。
　　研究的結(jié)果如下：
　　(1)北冬蟲夏草多糖對(duì)CCl4致小鼠急性肝損傷的血清ALT、AST、ALP和血清總膽紅素及NAGase的影響。灌服北冬蟲夏草多糖2 W后，與模型組比較，北冬蟲夏草多糖劑量組能使各試驗(yàn)組小鼠的血清ALT、AST、ALP活性和血清

5、總膽紅素含量降低，NAGase活性下降，高劑量組與聯(lián)苯雙酯組差異極顯著(P＜0.01)。灌服北冬蟲夏草多糖4 W后，北冬蟲夏草多糖高劑量組小鼠的血清ALT、AST、ALP、NAGase活性與空白對(duì)照組比較差異不顯著(P>0.05)，血清總膽紅素含量差異顯著(P＜0.05)。
　　(2)北冬蟲夏草多糖對(duì)CCl4致小鼠急性肝損傷的肝均漿SOD、GSH、MDA的影響。灌服北冬蟲夏草多糖多糖2W后，與模型組比較，北冬蟲夏草多糖各試驗(yàn)組小鼠

6、的肝均漿中SOD活性升高、GSH的含量增加，肝臟組織MDA的含量降低，北冬蟲夏草多糖低劑量組效果差異顯著(P＜0.05)，高劑量組差異極顯著(P＜0.01)。灌服北冬蟲夏草多糖4 W，與空白對(duì)照組相比，北冬蟲夏草多糖各劑量組效果明顯，其中高劑量組效果最佳，SOD活性明顯升高，GSH、MDA含量與空白組比較差異不顯著(P>0.05)。
　　(3)光學(xué)顯微鏡觀察(HE染色)。模型組肝臟結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞，中央靜脈周圍的肝細(xì)胞凝固性壞死，肝臟

7、細(xì)胞呈現(xiàn)廣泛的中、重度水泡變性或空泡變性和脂肪變性，大片肝細(xì)胞成無結(jié)構(gòu)的紅染和細(xì)胞碎片，少量殘存的肝細(xì)胞不同程度細(xì)胞變性。灌服北冬蟲夏草多糖2W后，北冬蟲夏草多糖各試驗(yàn)組均表現(xiàn)出一定的抗損傷和修復(fù)作用。高劑量組肝細(xì)胞排列比較整齊,部分肝細(xì)胞輕度腫脹，細(xì)胞壞死明顯減少，雙核細(xì)胞增多，呈現(xiàn)較為明顯的肝臟損傷后的修復(fù)過程。灌服北冬蟲夏草多糖4W后，可見各試驗(yàn)組小鼠肝組織空泡變性和脂肪變性明顯減少甚至消失，僅有少量的壞死，且北冬蟲夏草多糖高劑量

8、組與聯(lián)苯雙酯組肝細(xì)胞雙核細(xì)胞增多。
　　(4)北冬蟲夏草多糖對(duì)CCl4致小鼠急性肝損傷細(xì)胞凋亡的影響。灌服北冬蟲夏草多糖2 W，光鏡觀察，模型組可見肝細(xì)胞凋亡數(shù)量較多，單個(gè)或成群分布；北冬蟲夏草多糖組凋亡細(xì)胞數(shù)量較少，散在分布。灌服北冬蟲夏草多糖4 W，模型組凋亡細(xì)胞數(shù)目明顯減少，北冬蟲夏草多糖組肝細(xì)胞凋亡數(shù)目明顯減少，其中高劑量組效果最明顯，表明北冬蟲夏草多糖對(duì)急性肝損傷小鼠的肝臟的修復(fù)作用。
　　研究的創(chuàng)新點(diǎn)如下：