紫花苜蓿NFF2高效組織培養(yǎng)再生體系的建立.pdf

1、苜蓿是目前世界上栽培歷史最悠久、分布最廣泛的多年生豆科牧草，一直以來(lái)在畜牧業(yè)生產(chǎn)中發(fā)揮著重要作用。但是，隨著草場(chǎng)植被的嚴(yán)重退化及草場(chǎng)生態(tài)環(huán)境的破壞，細(xì)菌、真菌、卵菌等各種菌及病毒病原引起的植物病害都導(dǎo)致苜蓿作物產(chǎn)量降低，由于畜牧業(yè)對(duì)牧草的需求量日益增加，因此培育出大量?jī)?yōu)質(zhì)高產(chǎn)苜蓿來(lái)補(bǔ)充畜牧業(yè)對(duì)牧草日益增加的需求，這項(xiàng)工作已迫在眉睫。要想從根本上解決這一問(wèn)題，必需借助生物技術(shù)輔助育種，生物技術(shù)是紫花苜蓿等牧草產(chǎn)量和品質(zhì)遺傳改良的重要途徑之

2、一。高效、穩(wěn)定的再生體系是苜?；蚬こ碳夹g(shù)利用的關(guān)鍵，而紫花苜蓿的再生受基因型和環(huán)境條件影響很大，苜蓿不能穩(wěn)定的高頻再生始終是苜?；蚬こ炭缭桨l(fā)展的瓶頸。本文就目前苜蓿在生物技術(shù)試驗(yàn)中存在的問(wèn)題進(jìn)行了分析，并對(duì)紫花苜蓿進(jìn)行研究，希望為NFF2再生體系的建立和基因工程的研究提供一定的參考。紫花苜蓿NFF2是加拿大廣泛種植及應(yīng)用的品種，但到目前為止還沒(méi)有關(guān)于紫花苜蓿NFF2有效組織培養(yǎng)再生體系的報(bào)道，導(dǎo)致紫花苜蓿NFF2在生物技術(shù)上的研究應(yīng)

3、用受到限制。
　　基于此，本試驗(yàn)以易于被農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)染的紫花苜蓿NFF2為研究對(duì)象，采用三部分6種離體材料作為外植體，一部分取自生長(zhǎng)7d的NFF2無(wú)菌幼苗的子葉和下胚軸，一部分取自培養(yǎng)30-50d后的葉片和葉柄，還有一部分取自龍湖實(shí)驗(yàn)田生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲害、生長(zhǎng)2年的葉片和葉柄，研究不同激素種類、配比、不同培養(yǎng)條件對(duì)其愈傷組織誘導(dǎo)的影響，以及不同分化培養(yǎng)基對(duì)愈傷組織分化的影響，希望建立一套NFF2的高頻、穩(wěn)定的再生體系，為進(jìn)一步構(gòu)建苜蓿

4、轉(zhuǎn)基因系統(tǒng)奠定基礎(chǔ)。
　　研究?jī)?nèi)容包括以下幾個(gè)方面:進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)的最佳外植體是采用30-50d的無(wú)菌苗葉柄和實(shí)驗(yàn)田的葉枘。對(duì)實(shí)驗(yàn)田葉柄和葉片采取最佳的消毒方法為0.1％HgCl2處理8min;對(duì)外植體進(jìn)行7d暗培養(yǎng)，可以有助于細(xì)胞的增值和器官的分化，在誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)的時(shí)期，選用改良SH2K附加1mg/L2，4-D和0.2mg/LKT，愈傷誘導(dǎo)率好，可達(dá)91％，且周期短。試驗(yàn)所選用最佳愈傷組織繼代培養(yǎng)基為改良BOi2Y;最佳愈