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文檔簡介
1、十字花科植物根腫病,是由蕓薹根腫菌(Plasmodiophora brassicae Woron.)侵染引起的一種世界性土傳病害,該病流行蔓延時(shí),可造成十字花科作物產(chǎn)量下降,嚴(yán)重時(shí)甚至造成絕收。多數(shù)十字花科作物因具食用或經(jīng)濟(jì)價(jià)值而被各大產(chǎn)地大規(guī)模種植,這在一定程度上也加劇了根腫病在各產(chǎn)地的發(fā)生流行。
根腫病目前仍無切實(shí)有效的防治方法,部分用于化學(xué)防治的藥劑又容易造成環(huán)境污染且成本較高,因此,尋找能夠安全、高效防治根腫病的方法,
2、具有重要意義,生物防治因其來源廣泛、對(duì)人畜和環(huán)境安全而備受研究者的青睞。
根腫菌屬于專性寄生菌,不能通過傳統(tǒng)篩選生防菌的方法獲得有效菌株,目前的篩選方法多為周期較長的大田篩選或者溫室盆栽篩選。
本研究借鑒傳統(tǒng)的篩選方法,以細(xì)胞壁成分與根腫菌休眠孢子囊壁主要成分相似的棉花枯萎病菌作為指示病原菌,進(jìn)行平板篩選,通過水培寄主,以生防菌直接抑制根腫病菌對(duì)根毛或?qū)ζ拥闹苯忧秩胱鳛樵u(píng)價(jià)篩選生防菌的直接依據(jù),同時(shí)輔助休眠孢子囊萌
3、發(fā)抑制及活性檢測試驗(yàn)、產(chǎn)幾丁質(zhì)酶活性試驗(yàn),最終選取兩株防治效果較好的菌株進(jìn)行溫室盆栽試驗(yàn),在評(píng)價(jià)生防菌株防治效果的同時(shí),驗(yàn)證該篩選方法的科學(xué)性。
1.根腫菌生防菌的分離篩選
生防菌分離采用土壤稀釋法,從采集的土樣中共分離得到放線菌94株,細(xì)菌111株;生防菌的篩選采用平板對(duì)峙法,經(jīng)首次篩選、二次篩選,最終獲得15株抑菌效果較好的菌株,抑菌帶8-17 mm不等,其中菌株SYZ2-6、YYD3-1、GAS1-9、FLD1
4、7-6、FLB2-2能夠產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶。
2.休眠孢子囊萌發(fā)抑制及活性檢測
休眠孢子囊萌發(fā)采用淺層液體培養(yǎng)法。隨著萌發(fā)時(shí)間的增加,不同處理組的累計(jì)萌發(fā)率呈上升趨勢;20d后,僅菌株GAS1-9、YYD3-1、FLD17-6、Itb295以及生防菌劑XF-1處理過的休眠孢子囊萌發(fā)率與對(duì)照組始終存在顯著性差異,抑制效果明顯。
用生防菌無菌發(fā)酵液處理休眠孢子囊。結(jié)果表明,經(jīng)菌株GAS1-9、YYD3-1、FLD17
5、-6、SYZ2-6發(fā)酵液處理的休眠孢子囊失活明顯。
檢測4℃存放時(shí)間對(duì)休眠孢子囊活性的影響,隨著存放時(shí)間的延長,休眠孢子囊失活率呈上升趨勢,存放10d以內(nèi),失活效果不顯著,存放15d以上,活性下降明顯。
3.生防菌控制病原菌侵染根毛
甘藍(lán)幼苗接種病原菌的同時(shí)施用生防菌無菌發(fā)酵液,分別于接種第7d、10d、15d隨機(jī)拔取幼苗,統(tǒng)計(jì)根毛侵染率。菌株GAS1-9、YYD3-1、SYZ2-6、FLD17-6及生防菌
6、劑XF-1處理的幼苗,根毛侵染率始終較對(duì)照組下降明顯,抑制效果顯著。
4.溫室盆栽防效測定
選取GAS1-9和FLD17-6作為研究對(duì)象,溫室盆栽采用菌土法進(jìn)行接種。
試驗(yàn)共設(shè)5個(gè)不同的生防菌處理組,接種第60 d,調(diào)查各植株根部的腫大情況。盆栽試驗(yàn)表明,這兩株生防菌施用3次以下時(shí),雖然不能有效降低植株的發(fā)病率,但是可以顯著降低病情指數(shù),當(dāng)施用次數(shù)大于4次時(shí),不僅可以顯著降低植株發(fā)病率,病情指數(shù)也有了顯著的
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