列當(dāng)高效生防菌的篩選及其防治機(jī)理研究.pdf

1、目的：寄生性雜草列當(dāng)在新疆很多地區(qū)均有發(fā)生，給當(dāng)?shù)毓芄?、加工番茄、向日葵、打瓜等重要?jīng)濟(jì)作物造成嚴(yán)重?fù)p失。為了防治列當(dāng)危害，篩選出對(duì)列當(dāng)強(qiáng)致病的生防菌株并明確其防治機(jī)理，為列當(dāng)?shù)挠行Х乐翁峁┘夹g(shù)支持。
　　方法：本研究從新疆列當(dāng)發(fā)生區(qū)采集地上部萎蔫、莖基部變色及自然死亡的列當(dāng)病樣進(jìn)行了采集、分離和初步鑒定，為新疆列當(dāng)生物防治提供菌種來源。通過離體接種、盆栽試驗(yàn)、小區(qū)試驗(yàn)和大田試驗(yàn)測(cè)定致病菌對(duì)列當(dāng)?shù)姆乐涡Ч?；并采用形態(tài)學(xué)和分子生物

2、學(xué)方法對(duì)致病性較強(qiáng)的菌株進(jìn)行了鑒定，并對(duì)其進(jìn)行單因素篩選和發(fā)酵工藝優(yōu)化的研究；對(duì)生防菌株毒素的提取和初步鑒定，采用了高效液相色譜法和氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）方法分析，明確高效生防菌的除草活性物質(zhì)。
　　結(jié)果:1、采集了1000株列當(dāng)病樣，通過分離共獲得526個(gè)分離物。在526個(gè)分離物中，鐮刀菌294個(gè)，占分離總數(shù)的55.89％；絲核菌153個(gè)，占29.09%；腐霉菌45個(gè)，占8.56%；其他34個(gè)，占6.46%。鐮刀菌、絲核菌

3、、腐霉菌是新疆地區(qū)列當(dāng)?shù)闹饕虏【?。?jīng)過離體接種得出引起列當(dāng)?shù)陌l(fā)病最強(qiáng)的是腐霉菌，其次是鐮刀菌，最弱的是絲核菌。通過盆栽試驗(yàn)和小區(qū)試驗(yàn)結(jié)果分析得出8株致病性較強(qiáng)的致病菌，即4株腐霉菌HN4-0、HN2-0、HN12930B和FU-0和4株鐮刀菌KS7-2、KS3-3、KT-10和BT1883c。其中腐霉菌HN4-0的致病力最強(qiáng)，HN2-0和FU-0次之，HN12930B的致病力相對(duì)較弱；鐮刀菌KS7-2和KS3-3的致病力強(qiáng)，KT-10

4、和BT1883c的致病力相對(duì)較弱。
　　2、通過3株腐霉菌的生物學(xué)特性、菌落形態(tài)特征及藏卵器、雄器和孢子囊的形態(tài)檢測(cè)，并參照余永年編寫對(duì)腐霉菌的描述初步確定菌株HN4-0和HN2-0為瓜果腐霉，F(xiàn)U-0為終極腐霉。通過4株鐮刀菌的菌落形態(tài)、大小孢子形態(tài)及產(chǎn)孢方式、厚垣孢子的形態(tài)特征，并參照王拱辰的方法初步確定KS7-2和KS3-3為茄病鐮孢，KT-10為尖孢鐮孢，BT1883c為F.cerealis。并采用18SrDNA的ITS區(qū)

5、序列分析，與形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果相同。
　　3、通過對(duì)生防菌株HN4-0進(jìn)行單因素篩選和發(fā)酵工藝優(yōu)化的研究，明確了其生長(zhǎng)最適碳源是玉米粉，最適氮源是豆粕，最適培養(yǎng)溫度是28℃，最適pH值范圍為7.0。對(duì)生防菌株HN4-0毒素的提取和初步鑒定，采用了高效液相色譜法和氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）方法分析，明確了HN4-0的除草活性物質(zhì)為鄰苯二甲酸二甲酯。通過對(duì)除草活性物質(zhì)對(duì)列當(dāng)抑制性的測(cè)定及最適稀釋濃度的篩選，明確了生防菌HN4-0防治列當(dāng)

6、的機(jī)制。
　　結(jié)論：篩選出高效生防菌株腐霉菌HN4-0，通過形態(tài)學(xué)特征觀察和18SrDNA分析鑒定其為瓜果腐霉Pythiumaphanidermatum。通過單因素篩選和發(fā)酵工藝優(yōu)化，得出最適碳源（玉米粉）為35.31g/100mL，pH值為7.91，培養(yǎng)溫度為28.11℃時(shí)，最大的發(fā)酵產(chǎn)量預(yù)測(cè)值達(dá)到1.377g/100mL。通過高效液相色譜法和氣相色譜-質(zhì)譜法分析生防菌HN4-0乙酸乙酯相提取液的除草活性物質(zhì)為鄰苯二甲酸二甲酯。