基因槍共轉(zhuǎn)化小麥初探及高代TaCHP轉(zhuǎn)基因株系的耐鹽堿分析.pdf

1、小麥?zhǔn)鞘澜缟献钪匾募Z食作物之一，土壤鹽堿化嚴(yán)重影響了小麥的產(chǎn)量，培育耐鹽堿小麥新品種是解決世界性糧食危機(jī)的重要手段。受物種基因庫(kù)及傳統(tǒng)雜交技術(shù)的限制，小麥新種質(zhì)開發(fā)遇到了困難。植物遺傳轉(zhuǎn)化在為遺傳育種提供新方向的同時(shí)，其潛在的生物安全問題又對(duì)轉(zhuǎn)基因育種工作提出了新的要求。
　　實(shí)驗(yàn)室前期利用小麥莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)轉(zhuǎn)化法獲得了耐鹽性增強(qiáng)并能穩(wěn)定遺傳至T4代的TaCHP轉(zhuǎn)基因株系。本研究在實(shí)驗(yàn)室中通過對(duì)T5代TaCHP轉(zhuǎn)基因株系的分子鑒定，

2、驗(yàn)證了其遺傳的穩(wěn)定性;比較了在NaCl單鹽處理和鹽堿土中種子萌發(fā)和早期幼苗發(fā)育的差異。比較了種植于東營(yíng)鹽堿試驗(yàn)田中的T5代轉(zhuǎn)基因株系及未轉(zhuǎn)基因?qū)φ眨谛←湽酀{期和成熟期相關(guān)農(nóng)藝性狀和生理指標(biāo)，分析了轉(zhuǎn)基因株系在鹽堿試驗(yàn)田中增產(chǎn)的主要原因。為避免轉(zhuǎn)基因載體框架帶來的生物安全問題，采用基因槍共轉(zhuǎn)化最小線性表達(dá)框技術(shù)，將耐逆相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子TaCHP基因?qū)胄←溣着邅碓吹呐咝杂鷤M織，獲得了可育再生植株。
　　主要研究成果如下:
　　

3、1.構(gòu)建了psTaCHP載體，通過基因槍共轉(zhuǎn)化最小線性表達(dá)框技術(shù)，將TaCHP基因?qū)胗着邅碓吹牡男←満松?號(hào)、科農(nóng)199、矮抗58等愈傷組織中。經(jīng)Basta篩選和PCR驗(yàn)證，獲得了5株T0代陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因植株并已收獲種子。
　　2.實(shí)驗(yàn)室中，對(duì)水培處理的T5代TaCHP轉(zhuǎn)基因株系，進(jìn)行PCR、RT-PCR、Southernblot等遺傳穩(wěn)定性的分子驗(yàn)證和耐鹽相關(guān)生理指標(biāo)測(cè)定;測(cè)定了轉(zhuǎn)基因株系及對(duì)照，在NaCl單鹽處理和鹽堿土處理下種