利用基因槍轉(zhuǎn)化技術(shù)創(chuàng)造抗病大豆新材料.pdf

1、大豆是世界上重要的經(jīng)濟(jì)作物，隨著人口的增長(zhǎng)對(duì)大豆的需求量在不斷的增加。病害一直是嚴(yán)重影響大豆產(chǎn)量和品質(zhì)的重要因素之一，危害根部病害主要是:立枯病、猝倒病、萎枯病，據(jù)調(diào)查每年由于根腐病造成大豆減產(chǎn)在10％左右，嚴(yán)重影響大豆產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。因此，如何提高大豆的抗病性是人們亟待解決的問(wèn)題，傳統(tǒng)育種方式雖然能解決大豆的抗病性，但是需要的時(shí)間長(zhǎng)，新培育的品種抗性比較單一，通過(guò)栽培管理和噴施農(nóng)藥在一定程度上能夠減少大豆病害的影響，但是長(zhǎng)期噴施農(nóng)藥不僅污

2、染環(huán)境，而且會(huì)提高植物病原菌的抗藥能力。
　　 隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，人們對(duì)植物抗病基因工程研究的不斷深入，人們可以有目的的將抗病基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，用來(lái)提高植物廣譜的、持久的抗病能力。同時(shí)還為大豆的育種提供新的種質(zhì)資源，植物病原細(xì)菌的hrp(hypersensitive reaction and pathogenicity gene)基因編碼harpin蛋白能誘導(dǎo)植物產(chǎn)生一系列抗性反應(yīng)，使植物獲得廣譜的抗病能力和促進(jìn)植物的生長(zhǎng)。

3、Harpin蛋白是受hrp基因調(diào)節(jié)并通過(guò)Ⅲ型泌出通道分泌的一類(lèi)蛋白質(zhì)，它們的共同特點(diǎn)是:富含甘氨酸，對(duì)熱穩(wěn)定，對(duì)蛋白酶敏感。hrpZPsta是從丁香假單胞菌煙草致病變種(Pseudomonassyringae pv.tabaci) Psta218菌株中克隆，該基因大小約為420bp，能在煙草上引起過(guò)敏反應(yīng)誘導(dǎo)植物的抗病性。
　　 體細(xì)胞胚是基因槍轉(zhuǎn)化方法重要的靶組織，主要是通過(guò)未成熟子葉體細(xì)胞胚誘導(dǎo)途徑發(fā)生，體細(xì)胞胚的誘導(dǎo)對(duì)大豆

4、的基因型有很大的依賴(lài)性。不同大豆基因型誘導(dǎo)體細(xì)胞胚的質(zhì)量是有差異的。基因槍轉(zhuǎn)化方法不僅轉(zhuǎn)化效率高且操作簡(jiǎn)單，是大豆重要的遺傳轉(zhuǎn)化方法之一。
　　 本試驗(yàn)構(gòu)建了pDT-hrpZ植物表達(dá)載體，選取北方41個(gè)春大豆進(jìn)行體細(xì)胞胚誘導(dǎo)，利用基因槍方法將hrpZ基因轉(zhuǎn)入大豆未成熟子葉體細(xì)胞胚中。并對(duì)轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行了分子生物學(xué)檢測(cè)。結(jié)果表明:
　　 1.墾豐23的體細(xì)胞胚的發(fā)生率最高為99.7％，并且體細(xì)胞胚鮮綠色呈葡萄狀、每個(gè)未成熟